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ROR2基因小干扰RNA表达载体构建及其功能_论文

医錾 旱 理 论与 甄践 2 0 1 7 年第 3 0 卷第 1 3 期  V o 1 . 3 0 , No . 1 3 , J u l   2 0 1 7  J   Med   T h e or &P r ac 匿   1 8 7 3   ROR2基 因小 干 扰 RNA 表 达 载 体 构 建及 其 功 能  黄 建 军  石  莺  陈 忠益  曾国庆  丁振华  1 福建省厦 门市海沧 医院骨科 3 6 1 0 2 6 ;   2 厦 门医学院  摘要  目的 : 设 计和构建 RO R2 基 因特异性 的小干扰 RN A体 内表 达载体 , 筛选抑制 R O R2 表达 的有效小 干扰 RNA,   并初 步探讨 RO R 2的功能 。方法 : 化学合成法合成 重组质粒 R OR 2   s i R NA; 脂质 体法将其 转染人人 骨 肉瘤 S a o S - 2细  胞株 , RT - P C R和 We s t e r n - b l o t i n g法检验其对 R OR 2 基 因及蛋 白表达水 平的影 响。结果 : ( 1 ) 成 功构建 了针 对 R OR 2   的小干扰 RN A, 并 将其转染人人骨 肉瘤 S a o S - 2 细胞株 ; ( 2 ) RT - P C R结果显示 , 转染后 干扰组 RO R2   mR NA的表达水  平 明显低于阴性对照组 和空白组( P<O . 0 5 ) , 而空 白组和 阴性对照组 间的差 异无 统计 学意 义( P>O . 0 5 ) ; ( 3 ) We s t e r n -   b l o t i n g结果显示 , 转染后干扰组 R O R2 蛋 白表 达水平明显低于 阴性对 照组 和空白组 ( P<0 . 0 5 ) , 而空 白组 和阴性对 照  组 之 间差 异 无 统 计 学 意 义 ( P >O . 0 5 ) 。结 论 : 成功构 建 R OR 2   s i R NA, 该 质 粒 下 调 人 骨 肉瘤 S a o S - 2细 胞 中 R OR 2基  因和 蛋 白 的 表 达 水 平 。   关键 词 R NA干扰 R OR 2 小干扰 RNA 骨 肉瘤  中 图分 类 号 : R7 3 8 . 1   文献标识码 : A  d o i : 1 0 . 1 9 3 8 1 / j . i s s n . 1 0 0 1 — 7 5 8 5 . 2 0 1 7 . 1 3 . 0 0 1   C o n s t r u c t i o n   a n d   F u n c t i o n a l   An ly a s i s   o f   S h o r t   I n t e r f e r i n g   RNA  E x p r e s s i o n   Ve c t o r s   o f   Ta r g e t i n g   Ge n e   ROR2   H UA N G   J i a n j n n*, S i l l   Yi n g , C H E N   Z h o n g y i , e t   a 1 . *De p a r t me n t   o f   O r t h o p e d i c s , Xi a me n   Ha i c a n g   Ho s p i t a l , F  i a n   Pr o vi n c e  3 61 026   A B S T R A C T   Ob j e c t i v e : T o   d e s i g n   a n d   c o n s t r u c t   t h e   e x p r e s s i o n   v e c t o r   t h a t   c a n   e x p r e s s   t h e   s h o r t   i n t e r f e r i n g   R NA ( s i R—   NA)a g a i n s t   Re c e p t o r   Ty r o s i n e   Ki n a s e - l i k e   Or p h a n   Re c e p t o r   2( ROR2)g e n e , s c r e e n   t h e   e f f e c t i v e   t a r g e t   s e q u e n c e   o f   s i RNA  a n d   e x p l o r e   t h e   f u n c t i o n   o f   ROR2 . Me t h o d s : We   d e s i g n e d   a n d   c h e mi c a l l y   s y n t h e s i z e d   s e q u e n c e - s p e c i f i c   s i RNA  t a r g e t i n g   ROR2   g e n e 。 R( ) R2   s i RNA  wa s   t r a n s f e c t e d   i n t o   h u ma n   o s t e o s a r c o ma t o u s   c e l l   1 i n e   S a o S - 2   b y   u s i n g   Li p o —   f e c t a mi n e T  2 0 0 0 .We   d e t e c t e d   t h e   c h a n g e   o f   ROR2   mRNA  e x p r e s s i o n   b y   RT— P CR  a n d   t h e   c h a n g e   o f   ROR2

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