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脂多糖和地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响_论文

? 94 ? 1   中国药物与临床 2 1 年 8 01 月第 1 卷第 8 C i s  e ei & Ci c , uut 0 1 o 1 ,m   1 期 h e R m d s l i A gs 2 1, 1 1 8 ne e ns   V . N 脂 多糖和地塞米松对大 鼠肺 泡 巨噬细胞 凋亡的影 响  陈天狮 乔玉宏 张爱珍 冀小玲 弓清梅 马 珂  急性肺损伤 (ct ln  jr, U) aue u gi uyA 是常见 的破坏性极大    n 的 ,以肺泡及肺 实质发生 急性炎症 过程为 特征的 临床 综合  征。 目前被认为是一种介质病。越来越多的证据表 明[ , 1 肺    , 1 . 标本收集保存 [ 将 各组 的贴 壁细胞先 反复吹打 , .1 3 6 ] : 分  组收集 到 2 4个 1  l Om 的离心 管中离心 。用 P S缓 冲液 各 1 B   ml 洗涤收集 的细胞 团, 转移至 1   l E . m 的 P管中离 心。 03 5 用 .   I 含 l%A 牛血清 的 P S重悬 细胞后 。加入 07r 无水 乙  I l l O x B .n  l 醇混合以固定细胞 。封 口,2 一 O℃保存 。   1 . 细胞 染色检测 : .2 3 将保存的细胞放入冰块 中送检 。先将  泡 巨噬细胞 (A s激活后 通过 分泌炎 性细胞 因子 、 化 因 PM) 趋   子、 损伤介质和抗炎性细胞 因子等 . A 的发生 、 在 u 发展及转  归 中发挥重要作用。A 时肺部 免疫 细胞 的凋亡异 常在发病  u 中的作用越来越受到关 注_ 糖皮质激素(l ooio。C  3 ] 。 g ccr i G ) u t d c 通过 与其受体 的作用 来发挥其生物活性 , 与机体 的应激 和炎  症 反应密切相关 。 实验 以脂多糖 (pp l ac aieL S作  本 1 o o sch r ,P ) i y d 用 大鼠肺泡 巨噬细胞为模 型,揭示地塞米松对 P Ms 亡的  A 凋 细胞离心后弃上清 。 再用 P S B 洗涤细胞 , 尽 量除去 乙醇 。 以 细  胞 团用 04ml . 碘化丙 啶溶液重悬 ,放入 3  水浴箱 中避光    7C 染色后 , 于美国 F Ccn流式细胞仪 上样 检测 , A sa 观察 D A直  N 方 图。所有 资料均经 B co  ik sn软件收集 、储存 和分  etnDc i o n 析。   1 统 计 学 方 法  . 4 影响 ,进 而分析 了糖 皮质激 素治疗 A 时 的细胞 生物学 机  u 理。   1 材 料 与 方 法  计量资料用  学意义 。   2 结  果  表示 , 应用 Saa7 t  . t 0统计软件对各组均  1 主要材料与试剂  . 1 值 比较 用 t 检验 ;组间 比较用  检验 ,< .5为差异有统计  P0 0 健康雄性 Wia 大 鼠, 量(5 ̄0g由中国人 民解  sr t 体质 203 ), 放军军 事医学科学 院实验动物 中心提供 , 水 乙醇 、 化丙  无 碘 啶 (I溶液 和 1 巴 比妥钠为军事 医学科学 院试 剂中心提  P) %戊 21 凋亡率 的单 因素方差分析 :经 4种不 同的方法处理后 , .   各组 间 的凋亡 率 的变 化差 异有 统计 学 意义 ( = 3 . , = F 11 5P   8 0 0 。同时, .) 0 组间的两两 比较结果表明 :P 的凋亡率显著  L S组 高 于 c组 [2 .  ̄ . ) (41 31 %与 1 6 01) P .1 ,P + 0 9 .  ̄ . %, ≤00 ] L S   0 3 D x 的凋 亡率显 著低 于 L S组 [ 1.  ̄ . ) (41  ̄ e组 P (00 1 2 %与 2 .   6 7 0 31) P 0 1 ; D x组与 c组 的凋亡率 比较差 异无 统计  . %,< . ]而 e 9 0 学意义 [2 1 0 1%与 (.6 01 ) P O0 )。 (.  ̄ . ) 8 4 1  ̄ . %, > . ]  0 3 5 22 C 测定 各组 P Ms D A含量的 图谱 :本实验采用  .  F M A 的 N 供 ,P I 60 R M   4 培养基 , 1 胎牛血清购 自 I ioe 公司 , n tgn vr 脂多糖  (5 :5 和 D x购 自美 国 S ma 05 ) e B i 公司 。F CS a bl流式细  g A  C l ur i 胞 仪为美 国 B c nDc isn公 司产品 ,4 0系列 C 2 et   i no o k 50 O 孵箱  为美 国 N P O公 司产 品. 2 0 AC R 0 D型电子天平为德 国 Sr r s a oi   t n 公 司产 品。   1 大鼠 P Ms . 2 A 的分离培养与分组处理  参 照 Wa g等[ n   ] 和张方等[的实验方法略加改进 。用 l s ] %  戊 巴比妥钠按 4 g【体质量大 鼠腹腔注射麻醉后处死。 0m , l g 经  气管插 管并扎紧 固定插管 。 3 用 7℃生理盐水进行支气管肺泡  灌洗。收集支气管肺泡灌洗液 , 磷酸盐缓 冲液 (B ) P S 洗涤 , 用  R MI6 0 全培养基 悬浮细胞 团。按照 随机 的原 则分别将  P 14 完 2 4只大 鼠的 P MS培养 于 4 6 A 个 孔培养板 中( 每组为 1 ) 板 ,   门技术 排除 了成双 或聚集 的细胞 以及 发微弱荧光 细胞碎 片  的干扰性作用得到各组 P Ms D A含量 图谱。 A 的 N 结果发现 :  C 组 和 D x D A直方 图未 出现典 型亚二倍体 峰 ;P e组 N LS组和  L S D x组 D A直方

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