当前位置:首页 >> 生物学 >>

GST蛋白纯化


GST 的蛋白表达: 转化 BL21,挑菌,酶切验证,接种到 250 ml 的 2YT 带 Amp 的培养基,接种比例一般为 1: 100,每 3 小时测一次。37 度 250 转 3 小时,OD 一般为 0.6-1.5,加 1M IPTG(终浓度为 0.1 mM) 诱导在 30 度 4 小时,5000g 10 分钟收集细胞,晚上冻在-80 度。 裂解: STE 裂解液 (10mM Tris-HCl pH8.0; 150 mM NaCl; 1mM EDTA) , 加 100ug/ml lysozme, 1mM PMSF, 10mMDTT,), 冰上 20min 转动。 加 1%的 triton-100,超声 250s, 12000g 30min 取 上清,12000g20min 再取上清。 纯化: 活化 beads (用 500ul PBS 洗涤 3 次) , 放入上清结合, 室温 2h; 用加入 (1% triton-100, 1mM PMSF, 10mMDTT 0.5-1 M NaCl)的 PBS wash 4 次 elution3 次。 Elution Buffer:100 mM Tris-HCl pH8.0, 1% triton-100,1mM PMSF, 10mMDTT 150 mM NaCl 15mM glutathione) 。


赞助商链接
相关文章:
GST标签蛋白纯化原理
GST标签蛋白纯化原理 - GST 标签蛋白纯化原理 在实验中有过被高等教育的教授骂过:别人让你吃屎,你就去吃屎么?或者 稍微高级点的问候声:你有脑子么? 请稍微...
GST融合蛋白的纯化步骤
GST融合蛋白纯化步骤 - GST 融合蛋白纯化步骤 一、制取细胞的裂解物: 1.每 100ml 培养物的细胞沉淀悬于 4ml PBS 缓冲液; 2.加入溶菌酶至最终浓度 1mg/...
GST蛋白纯化
GST蛋白纯化 - 试剂配制 缓冲液的配制: 用来配缓冲液的水及化学试剂纯度要求很高,建议试剂配好后,用0.45μm滤膜过滤。 结合液:PBS,pH7.3(140mM NaCl,2.7mM...
GST融合蛋白纯化常见问题解答
GST融合蛋白纯化常见问题解答 - 武汉金开瑞的蛋白表达平台拥有大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,酵母,昆虫—杆状病毒,哺乳动物细胞五大重组表达平台.已有3000余种重组蛋白产品,...
GST标签蛋白纯化
标签: 纯化| 蛋白| 标签|GST标签蛋白纯化_生物学_自然科学_专业资料。 您的评论 发布评论 用户评价 这篇文档有word格式吗?GST标签蛋白纯化 2018-06-28 11:...
GST融合蛋白的纯化步骤
GST融合蛋白纯化步骤 - GST 融合蛋白纯化步骤 一、制取细胞的裂解物: 1.每 100ml 培养物的细胞沉淀悬于 4ml PBS 缓冲液; 2.加入溶菌酶至最终浓度 1mg/...
GST纯化蛋白
GST纯化蛋白 - 表达纯化 GST 融合蛋白 (准备工作:灭离心管上面没有刻度,有塞子的管子。很小的三角烧瓶,用锡箔纸封口) (1)已经转化的菌液,或者重新转化 BL21(...
GST融合蛋白构建、表达与纯化
GST融合蛋白构建、表达与纯化 - GST 表达融合蛋白 载体 pGEX-KG 大小:5006bp,氨苄青霉素抗性(Ampr) ,IPTG 诱导表达 酶切位点:BamHI 930、SmaI 93...
GST融合蛋白的纯化
GST融合蛋白纯化 - GST 融合蛋白纯化 诱导和收集菌体 在一定的诱导条件下 IPTG 诱导蛋白的合成。18~25℃的低温条件下培养可以 使大部分蛋白融合蛋白可溶性...
GST纯化步骤
GST 融合蛋白纯化方法 1 目的片段接入 pGEX 载体; 2 涂板,挑单克隆,摇菌至 OD600≈1.0,加入 IPTG(终浓度 1 mM)诱导 6-8 h; 3 收菌,每升菌液约以 ...
更多相关标签: