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实验五


实验五 RT-PCR ---逆转录 ---逆转录

一 实验目的
掌握逆转录的基本原理和方法。 掌握逆转录的基本原理和方法。

逆转录也称反转录,是某些生物(如鸡的肉瘤病毒、HIV等 逆转录也称反转录,是某些生物(如鸡的肉瘤病毒、HIV等)的特殊复制 方式。它们的遗传信息载体是RNA 而不是DNA 因此,在感染细胞时, DNA。 方式。它们的遗传信息载体是RNA 而不是DNA。因此,在感染细胞时,首先经 过逆转录作用成为双链DNA,才能整合到宿主基因组中去。 过逆转录作用成为双链DNA,才能整合到宿主基因组中去。 DNA 这个过程由逆转录酶催化,它具有以RNA为模板合成DNA。 这个过程由逆转录酶催化,它具有以RNA为模板合成DNA。 RNA为模板合成DNA 逆转录现象和逆转录酶是分子生物学研究中的重大发现,是对经典中心法则重 逆转录现象和逆转录酶是分子生物学研究中的重大发现, 要补充。 要补充。

二 实验药品
模板RNA 模板RNA dNTP 随机引物 反转录酶AMV或 反转录酶AMV或M-MLV AMV 5×buffer Rnase Inhibitor

三 实验步聚
反转录体系 第一步: 第一步:
模板RNA 模板RNA dNTP 随机引物 DEPC水 DEPC水 70℃ 第二步: 第二步: 反转录酶AMV或 反转录酶AMV或M-MLV AMV 5×buffer Rnase Inhibitor DEPC水 DEPC水 37℃ 60min 0.5uL 5uL 0.2uL 9.3uL 95 ℃ 5min 4 ℃ 10min 2uL 2uL 2uL 4uL 5min 4 ℃ 10min

混样制备
X(体积)×N(样本数)×1.1 体积) N(样本数) 样本数

混样制备
X(体积)×N(样本数)×1.1 体积) N(样本数) 样本数

四 实验结果

五 注意事项
防止污染 加样准确


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