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生物样品定量分析方法指导原则


Drug Evaluation Research

第 34 卷 第 6 期

2011 年 12 月

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? 专 论 ? 生物样品定量分析方法指导原则(草案)
钟大放 1*,李 高 2,刘昌孝 3
201203 430030 300193 1. 中国科学院上海药物研究所,上海

2. 华中科技大学同济药学院,湖北 武汉

3. 天津药物研究院 释药技术与药代动力学国家重点实验室,天津 摘

要:根据目前国际上对生物样品定量分析的相关指导原则,建议《中国药典》修订和扩充现有的的指导原则,以适应新

药开发和仿制药开发的需求。内容包括:指导原则适用范围,生物分析方法确证,试验样品分析,配体结合分析,试验报告, 以及生物分析相关定义。其中,对基质效应、已测样品再分析、稳定性考察等列出了详细的要求。 关键词:生物样品分析指导原则;生物分析方法确证;基质效应;已测样品再分析 中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1674 - 6376 (2011) 06 - 0409 - 07

Guidance on Bioanalysis: Method validation and analysis of study samples (Draft)
ZHONG Da-fang1, LI Gao2, LIU Chang-xiao3
1. Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201203, China 2. Tongji College of Pharmacy, Center China University of Science and Technology, Wuhan 430030, China 3. State Key Laboratory of Drug Delivery Technology and Pharmacokinetics, Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China Abstract: This is the draft version for the Guidance on Bioanalysis in China Pharmacopoeia, 2015 Edition. The recommendations are based on the current international guidelines and for adepting the requirements to the development of new drugs and generic drugs. It is composed of scope of the guidance, method validation, analysis of study samples, incurred samples reanalysis, ligand binding assays, reports, and definitions. Detailed requirements for matrix effect, incurred samples reanalysis, and stability investigation are introduced. Key words: guidance on bioanalysis; method validation; matrix effect; incurred samples reanalysis

本指导原则是为中国药典 2015 年版附录准备 的草案。 其内容参考了中国药典 2010 年版指导原则 (生物样品定量分析方法相关内容) ;美国 FDA 指导原则(2001) ,欧洲 EMA 指导原则(草案, 2009) ,以及中国 SFDA 指导原则(2005,生物 样品定量分析方法相关内容) 1 范围 对于新药开发和仿制药开发,准确测定生物基 质(全血、血浆、尿)中的药物浓度非常重要,这 些数据可被用于资料申报。根据毒动学、药动学和 生物等效性试验的结果做出关键性决定,以支持药 品的安全性和有效性。因此,必须很好地表征、完 整地确证和记录应用的生物分析方法。
收稿日期:2011-08-26 *通讯作者 钟大放 E-mail: dfzhong@mail.shcnc.ac.cn
[4-6] [3] [2] [1]

本指导原则提供生物分析方法确证的要求,也 涉及生物分析方法本身的特定方面,如临床前或临 床试验样品的实际分析。还进一步指出,何时可能 使用部分确证或交叉确证,替代一个生物分析方法 的完整确证。 生物分析方法确证和试验样品分析应符合 GLP 原则。但是,由于临床生物分析试验处于 GLP 范围之外,所以开展临床试验的地点不需要作为国 家 GLP 贯彻程序的一部分被监测。此外,对于在人 体开展的临床试验,应该遵循 GCP 原则。 2 2.1 生物分析方法确证 分析方法的完整确证 对于任何分析方法,无论是新方法还是基于文 献的方法,都应该进行完整的确证。

。目前,全球性的
[7-8]

生物样品定量分析方法指导原则正在讨论中



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分析方法确证的主要目的是,证明特定方法对于测 定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性,例如全 血、血浆或尿。此外,方法确证应采用与试验样品 相同的抗凝剂。 一个生物分析方法的主要特征是确保其性能和 分析结果可靠性所必需的, 这些特征包括: 选择性, 定量下限,响应函数(校正曲线性能) ,准确度,精 密度,基质效应,生物基质、储备液以及工作溶液 中分析物和内标在储存和处理全过程中的稳定性。 通常需要测定一个分析物或药物,但有时可能 需要测定多个分析物。 这可能涉及两种不同的药物, 也可能涉及一个母体药物及其代谢物,或一个药物 的对映体或异构体。在这些情况下,确证和分析的 原则适用于所有涉及的分析物。 对照标准物质 在方法确证中,含有分析物对照标准物质的溶 液将被加入到空白生物基质中。此外,色谱方法通 常使用内标。 对照标准物质和内标的质量得到保证是重要 的,因为其质量(纯度)可能影响到分析结果。因 此,应该从权威的和可追踪的来源获得对照标准物 质。适当的标准物质包括:有分析证书的标准品, 如法定的标准品,商业途径获得的标准品,或实验 室内部制备及外部非商业组织制备,且经过完整表 征的标准品。 应该科学论证对照标准物质的适用性。 对于内标,不必要求有合格证书的标准品,只要能 证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关 的任何杂质不产生干扰。 无论哪个供货商,都需要提供分析证书,以确 认对照标准物质的质量、稳定性、储存条件、失效 日期、批号和纯度。 当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽 可能使用稳定同位素标记的内标。但是,标记的标 准品必须具有最高的同位素纯度,并且不发生同位 素交换反应。否则,存在任何未标记的分析物都将 导致结果的偏差。 2.1.1 选择性 该分析方法应该能够区分目标分析 物和内标与基质的内源性组分(如全血、血浆、尿) 或样品中其他组分。应该使用至少 6 个来源的适宜 的空白基质来证明选择性,它们被分别分析并评价 干扰。当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应 的 20%时,即可以接受。 也可能必须考察药物代谢物经样品预处理生成

的分解产物以及可能的同服药物引起干扰的程度。 应该考虑通常用于受试者群体试验的同服药物。 在适当情况下,也应该评价代谢物在分析的连 续步骤中(包括提取步骤)转化回母体分析物的可 能性(如酸性代谢物成酯,不稳定 N-氧化物或葡 萄糖苷酸代谢物,内酯环结构) 。最好在空白基质 (和/或加入分析物浓度不高于定量下限 3 倍的样 品)中加入相应代谢物,其浓度代表体内代谢物的 最高浓度,应该处理该样品,通过色谱图评价母体 分析物的生成。应该确定回复转化的程度,并讨论 对试验结果的影响。 2.1.2 残留 应该在方法建立中考察残留并使之最 小。残留可能不影响准确度和精密度。应通过在注 射高浓度样品或校正标样后,注射空白样品来确证 残留。如果残留看起来不可避免,则应考虑特殊措 施,在方法确证时检验并在试验样品分析时应用这 些措施。这可能包括在可能的高浓度样品后注射空 白样品,然后分析下一个试验样品。 应该避免样品随机化,因为这可能干扰对残留 问题的检测和评估。 2.1.3 定量下限 定量下限(LLOQ)是能够被可 靠定量的样品中分析物的最低量,具有可接受的准 确度和精密度。LLOQ 应适用于预期的浓度和试验 目的。 2.1.4 校正曲线 应该知道仪器对分析物的响应, 并且应该在指定的浓度范围内评价。通过加入已知 浓度的分析物(和内标)到空白基质中,获得各浓 度的校正标样进行预处理,其基质应该与目标试验 样品基质相同。方法确证中研究的每种分析物和每 一分析批,都应该有一条校正曲线。 在进行分析方法确证之前,应该了解预期的浓 度范围。校正曲线范围应该覆盖预期浓度范围,由 LLOQ(校正标样的最低浓度)和 ULOQ(定量上 限,校正标样的最高浓度)来决定。应基于科学信 息来说明该范围的依据。 应该使用至少 6 个校正浓度水平,不包括空白 样品(不含分析物和内标的处理过的基质样品)和 零浓度样品(含内标的处理过的基质) 。 应该使用能够简单且足够描述仪器对分析物响 应的关系式。在计算校正曲线参数时,空白和零浓 度样品不应被考虑。 应该提交校正曲线参数(线性拟合情况下:斜 率和截距) 此外, 。 测定校正标样后计算得出的浓度

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应与计算的平均准确度值一并提交。至少应该评价 3 条校正曲线。 校正标样算得的浓度应该在标示值的±15%以 内,LLOQ 除外,它应该在±20%内。校正标样最 少 6 个,至少 75%应满足上述标准。如果某个校正 标样结果不符合这些标准, 应该拒绝这一标样, 不含 这一标样的校正曲线应被重新评价,包括回归分析。 虽然可能从稳定性数据清楚知道,分析物在所 用基质中足够稳定,但推荐在生物分析方法确证中 使用新建立的校正曲线。 2.1.5 准确度 分析方法的准确度描述该方法测得 值与分析物真实浓度的接近程度(以百分比表示) 。 应采用加入已知量分析物的样品来评估准确度,即 质控样品(QC 样品) 。 在方法确证时,应通过至少 4 个浓度水平的至 少 5 个测定值的重复分析来确定准确度,浓度水平 覆盖校正曲线范围:LLOQ,在 LLOQ 浓度 3 倍之 内的低浓度 QC,校正曲线约 50%处的中浓度 QC, 以及校正曲线范围上限约 75%处的高浓度 QC。 应该根据校正曲线分析 QC 样品,将获得的浓 度与真实浓度对比。准确度应报告为真实值的百分 比。应通过单一分析批(批内准确度)和不同分析 批(批间准确度)获得 QC 样品值来评价准确度。 后者将支持不同时间的准确度。 为评价一个分析批中不同时间的任何趋势,推 荐以至少一个与预期分析批样品数相等的 QC 样品 分析批,来证明准确度。 批内准确度 为了确证批内准确度,应取一个分析批的 LLOQ,低、中、高浓度 QC 水平,每个浓度至少 用 5 个样品。准确度均值应在 QC 样品均值的 15% 之内。 LLOQ 除外, 此处应在标示值的 20%范围内。 批间准确度 通过至少两个不同天的 3 个分析批,每批在 LLOQ,低、中、高浓度 QC 样品的每个浓度至少 5 个测定值来评价。准确度均值应在 QC 样品标示值 的 15%范围内,LLOQ 除外,它应在标示值的 20% 范围内。 报告的测定准确度和精密度的确证数据应该包 括所有逸出值;但是,排除统计学确定的逸出值后 计算准确度和精密度,应该额外报告。 2.1.6 精密度 分析方法的精密度描述分析物重复 测定的接近程度。精密度用变异系数(CV)表示。

应该预先定义估计精密度的统计学方法,并根据标 准规范计算。应使用证明准确度样品的结果,证明 在同一批内和不同批间 LLOQ,低、中、高浓度 QC 样品的精密度。 批内精密度 对于 QC 样品, 批内 CV 值不得超过 15%, LLOQ 除外,它的 CV 值不得超过 20%。 批间精密度 对于 QC 样品, 批间 CV 值不得超过 15%, LLOQ 除外,它的 CV 值不得超过 20%。 2.1.7 稀释可靠性 样品稀释不应影响准确度和精 密度。应该通过向基质中加入分析物至高于 ULOQ 浓度,并用空白基质稀释该样品(每个稀释因子至 少 5 个测定值) 来证明稀释的可靠性。 , 准确度和精 密度应在设定的标准之内,即在±15%之内。稀释 的可靠性应该覆盖试验样品所用的稀释倍数。 2.1.8 基质效应 当使用质谱方法时,应该考察基 质效应。使用至少 6 批基质,如果适用,包括溶血 的或来自受试患者人群的样品基质。 对于每批基质,应该通过计算基质存在下的峰 面积(由分析加入最高 3 倍于 LLOQ 浓度的空白基 (分析物 质提取后测得) 与基质不存在下的峰面积 , 的纯溶液)比值,计算每一分析物和内标的基质因 子(MF) 。也应该通过分析物的 MF 除以内标的 MF,计算经内标归一化的 MF。 从 6 批基质计算的内标归一化的 CV 不得大于 15%。 如果不能适用上述方式,例如采用在线样品预 处理的情况,则应该通过分析至少 6 批基质,加入 最高 3 倍于 LLOQ 的浓度,3 次测定来获得批间的 变异。确证报告应包括分析物和内标的峰面积,以 及每一样品的计算浓度。从该浓度计算的总体 CV 不得大于 15%。平均浓度应在标示浓度的 15%范围 内。也应该对每批基质报告该平均浓度;如果对于 任何一批基质, 该均值与标示浓度的偏差大于 20%, 都将导致进一步考察。 如果给予受试者一种注射剂型,含有已知能产 生基质效应的药用辅料,例如聚乙二醇或聚山梨醇 酯,则应在空白基质效应之外,用含有这些辅料的 基质来研究基质效应。用于这一评价的基质应从给 予该辅料的受试者处获得,除非已经证明该辅料不 被代谢或不在体内转化。 2.1.9 稳定性 应该进行稳定性评价,以确保样品

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预处理和样品分析的每一步骤,以及使用的储存条 件,都不影响分析物的浓度。对于初始浓度的任何 偏差都必须在可接受限度内。 必须在分析方法的每一步骤确保稳定性,用于 检验稳定性的条件,例如样品基质、材料储存和分 析条件,都应该与实际试验样品的条件相似。不能 用文献数据证明稳定性。 采用低和高浓度 QC 样品至少 3 个样品,在预 处理后以及在所评价的储存条件后立即分析,确定 分析物和内标在试验基质中的稳定性。由新鲜制备 的校正标样获得校正曲线,根据校正曲线分析 QC 样品,获得的浓度与标示浓度相比较,其偏差应在 ±15%范围内。 应通过适当稀释,考虑到检测器的线性和测定 范围,检验储备液和工作溶液的稳定性。 稳定性试验应考察不同储存条件,时间尺度应 等于或超过试验样品储存的时间。 作为例子,通常应该评价下列稳定性检验: ● 储备液和工作溶液的稳定性; ● 从冷库储存条件到室温,基质中分析物的冷 冻和融化稳定性; ● 基质中分析物储存在冰箱中的稳定性,如果 适用; ● 基质中分析物在室温实验台上的稳定性; ● 基质中分析物在与试验样品相同储存温度 冷库中的长期稳定性; ● 处理过的样品在室温下或在试验过程储存 条件下(干燥提取物或在注射液中)的实验台上稳 定性,如果适用; ● 处理过的样品在注射器或自动进样器温度 下的仪器中/自动进样器中稳定性。 关于冷冻和融化稳定性:QC 样品在冰箱中设 定温度下储存和冷冻,然后在室温融化。融化后的 样品在同样条件下重新冷冻。在每一循环,样品都 应被冷冻 12 小时以上,然后被融化。冷冻-融化稳 定性的循环次数应等于或超过试验样品的冷冻/融 化循环次数。 关于基质中分析物在冷库中储存的长期稳定 性:QC 样品应被储存于冷库中,与试验样品相同 的储存条件且持续至少相同的时间。不接受使用试 验样品来评价长期稳定性,因为其标示浓度未知, 所以不能用于对照。推荐在实际样品测试开始前进 行长期稳定性评价。 3.1

对于受试者采集全血,并在储存前进一步预处 理的直接样品介质中分析物的稳定性应给予足够关 注,以确保由分析方法获得的浓度反映受试者采样 时刻的分析物浓度。 2.2 部分确证 在对已被确证的分析方法进行小幅改变情况 下,可能不需要完全的方法确证。需要部分方法确 证的可能改变包括:生物分析方法转移到另一个实 验室,改变仪器、浓度范围、储存条件等。应报告 所有的改变,并对重新确证或部分确证的范围说明 理由。 2.3 交叉确证 从不同试验地点获得的数据如果需要互相比较 时,应该进行分析方法的交叉确证。样品预处理的 差异或使用另一种分析方法可能导致两试验地点间 的不同结果。如果可能,应在试验样品被分析之前 进行交叉确证。对于交叉确证,同一系列 QC 样品 应被两地点的分析方法测定。交叉确证的结果对确 定获得的数据是否可靠,以及它们是否具有可比性 非常关键。两地点测定的差异不应超过 15%。 3 试验样品分析 在分析方法确证完成后,可以进行受试者样品 分析。根据方法确证和试验样品分析的时间间隔, 有时可能需要在试验开始前证实方法的效能。 应根据已确证的分析方法处理试验样品以及 QC 样品和校正曲线,保证分析批被接受。 分析批 一个分析批包括空白样品(不含分析物和内标 的基质样品,经过处理)和一个零值样品(含内标 的基质样品, 经过处理) 包括至少 6 个浓度水平的 , 校正标样,至少 3 个水平 QC 样品(低、中、高浓 度,双重样品或至少试验样品总数的 5%,两者中 取数目更多者) 以及被分析的试验样品。 , 所有样品 (校正标样、QC 和试验样品)应在同一样品批中被 处理和提取。应避免将同一分析批的样品分别进行 预处理。如果不能避免这种方式,例如由于实验台 上稳定性限制,则每批样品最好包括低、中、高浓 度 QC 样品。应在标准操作规程(SOP)中或在试 验计划中,预先建立接受标准,并且既应该针对整 个分析批,也应该针对分析批中每一部分样品定义 接受标准。 建议一名受试者的全部样品在同一分析批中分 析,以减少结果的变异。此外,可以接受在一个分

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析批中包括多名受试者的试验样品。QC 样品应该 分散到整个批中,即在分析批的开始、中间和结束 部分。也可以接受在分析批的开始放置低、中、高 浓度 QC 样品各一个,然后是试验样品,在分析批 结尾又一次放置低、中、高浓度 QC 样品。 3.2 分析批的接受标准 应在分析试验计划或 SOP 中, 规定接受或拒绝 一个分析批的标准。应该使用下列接受标准: 准确度 校正标样测定计算浓度应在标示值的±15%范 围内,LLOQ 除外,它应在±20%范围内。不少于 6 个校正标样中,至少 75%应符合这一标准。如果校 正标样中有一个不符合这些标准,则应该拒绝这个 标样,重新计算不含该标样的校正曲线,并应再评 价和进行回归分析。 应在 SOP 中预先规定是否拒绝 标样的决定标准, 并且应该独立于 QC 样品的结果。 如果拒绝的校正标样是 LLOQ,则应该认识到 此分析批的 LLOQ 是校正曲线的下一个可接受的较 高的校正标样浓度。如果最高浓度的校正标样被拒 绝, 则该分析批的 ULOQ 是校正曲线的下一个可接 受的较低浓度校正标样。如此修改的校正范围必须 覆盖所有 QC 样品(低、中、高浓度) 。 QC 样品的准确度值应该在标示值的±15%范 围内。6 个 QC 样品中至少 4 个,且每一浓度水平 至少 50%应符合这一标准。在不满足这些标准的情 况下,应该拒绝该分析批,相应的试验样品应该重 新分析。 QC 样品的批间(平均)准确度应该在标示值 的 15%范围内。 在同时测定几个分析物的情况下,如果一个分 析批对于一个分析物可以接受,而对于另一个分析 物不能接受,则接受的分析物数据可以被使用,但 应该重新分析样品,测定被拒绝的分析物。 精密度 批间精密度不得超过 15%。 3.3 校正范围 如果看起来很多试验样品的分析物浓度高于 ULOQ, 则在可能的情况下,应该延伸校正曲线的范 围。同样,如果校正曲线的范围显得过宽,以至于 大部分样品的分析物浓度落在校正曲线范围下部, 则校正曲线的范围应被缩窄,或应加入一个额外的 QC 样品浓度,使至少 2 个 QC 样品浓度落在试验样 品的浓度范围内。如果校正曲线范围被延伸,则该

分析方法应被重新确证,以保证准确度和精密度。 3.4 试验样品的重新分析 下列理由可被标明,用于重新分析试验样品: ● 由于校正标样和/或 QC 样品的准确度和精 密度不符合接受标准,导致一个分析批被拒绝; ● 试验样品中内标的响应与校正标样和 QC 样 品的内标响应差异显著, 如果事先在 SOP 中规定了 该标准; ● 进样不当或仪器功能异常; ● 测得的浓度高于 ULOQ,或低于该分析批的 LLOQ,且该批的最低浓度标样从校正曲线中被拒 绝,导致比其他分析批的 LLOQ 高; ● 在给药前样品或安慰剂样品中测得样品分 析物; ● 色谱不佳。 通常,不能接受由于药动学理由重新分析试验 样品。这对于生物等效性试验尤其重要,因为这可 能使该试验的结果受到影响和产生偏差。但是,可 以考虑将重新分析作为实验室考察的一部分,以鉴 别导致不正常结果的可能原因,并防止将来再次发 生类似问题。 在仪器故障的情况下,如果已经在方法确证时 证明了重新进样的重现性和进样器内稳定性,则可 以将样品重新进样。如果仅仅由于校正标样或 QC 样品失败,没有鉴定任何分析上的原因,而整个分 析批或个别校正标样或 QC 样品重新进样,是不能 接受的。 3.5 完整性 应在 SOP 中描述色谱的完整性。任何对 SOP 的偏离都应在分析报告中讨论。 3.6 已测样品再分析 在方法确证中使用校正标样和 QC 样品可能无 法模拟实际试验样品。例如,蛋白结合、已知和未 知代谢物的回复转化、样品均一性或同服药物引起 的差异,可能影响这些样品在处理和储存过程中分 析物的准确度和精密度。因此,推荐通过在一定时 间周期内重新分析试验样品,来评价实际样品测定 的准确度。检验的范围由分析物和试验样品决定, 并应该基于对分析方法和分析物的深入理解。至少 应该提供足够的可信性, 表明报告的浓度是准确的。 在已测样品分析显示偏差结果的情况下,应该进行 考察,应采取足够的步骤优化准确度和精密度。 如果药动学参数代表一个试验的基本终点,则

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推荐进行已测样品分析。对于人体试验样品,应该 对每个受试者群体或患者群体进行已测样品评价, 除非另外说明理由。对于生物等效性试验,应该总 是进行已测样品分析。推荐从几名受试者处获得试 验样品,分别接近于预期的最大浓度和在消除相。 样品不应合并,因为合并可能限制发现异常情况。 两次测得值的差异对于至少 67%的重复测试应在 20%范围内。 4 生物分析试验报告 试验负责人应在最终报告上签名和签日期,以 示对数据的可靠性负责, 并说明该试验符合 GLP 基 本原则的程度。 方法确证报告应该包括完整的分析计划、实施 和评价,遵循 GLP 基本原则。在报告中应包括关于 审计和视察的信息。 相关分析步骤的 SOP 应附在试验报告之后。 全部分析数据应该以电子版本形式保存,并根 据要求提供。 任何对分析计划的偏离都应该在分析报告中讨 论。 方法确证报告应该包括至少下列信息: ● 以表格形式给出的确证报告概要; ● 摘要叙述分析方法,如果适用,分析方法的 来源(参考文献和/或步骤的改动) ; ● 摘要叙述分析步骤(分析物,内标,样品预 处理、提取和分析的细节) ; ● 对照标准品 (来源, 批号, 分析证书, 稳定性) ; ● 校正标样和 QC 样品(基质包括抗凝剂,制 备,制备日期和储存条件) ; ● 分析批的接受标准; ● 样品踪迹(储存条件和持续时间) ; ● 分析:所有分析批和分析时间列表;所有分 析批的校正曲线结果列表,包括校正范围、响应函 数、回算浓度、批内和批间精密度和准确度;所有 分析批的 QC 结果列表(批内和批间精密度和准确 度) ;储备液、工作溶液、QC 的稳定性数据,覆盖 使用的储存条件;选择性、LLOQ、残留、基质效 应、稀释完整性的相关数据; ● 方法确证中获得的有偏差的结果,充分说明 采取措施的理由; ● 对方法和/或 SOPs 的偏差(描述偏差、对试 验的影响,支持性数据) 。 所有测定及每个计算浓度都必须出现在报告

中。 此外,对试验样品分析特别详尽的描述应该作 为一个单独的报告,并至少包括下列内容: ● 对照标准品(来源,批号,分析证书,稳定 性) ; ● 校正标样和 QC 样品(储存条件) ; ● 分析批的接受标准(简短描述,参考方法) ; ● 样品踪迹(接收日期和内容,接收时样品条 件,储存地点和条件,如果适用) ; ● 分析:分析批安排;所有分析批及分析日期 和结果列表, 标明哪些样品在哪些分析批中被分析; 所有(通过的)分析批的校正结果列表;超过接受 标准的值应该清楚标注;所有(通过的)分析批的 QC 结果列表;超过接受标准的值应该清楚标注; ● 失败的分析批 (身份, 分析日期, 失败原因) ; ● 对方法和/或 SOPs 的偏差(描述偏差、对试 验的影响,支持性数据) ; ● 重新分析(列表给出样品身份、重新分析理 由、原始分析值和重新分析值) ; ● 已测样品分析; ● 5~20%受试者的全部色谱图,包括相应的 QC 样品和校正标样的色谱图;对于生物等效性试 验,至少 20%受试者的色谱图。 5 生物分析相关定义 准确度(accuracy) :一个分析方法的准确度表 明其测得值与真实值或对照值的接近程度。 :分析方法是 分析方法(analytical procedure) 指执行分析的途径。应该对进行每项分析的必需步 骤进行详细描述。 校正范围(calibration range) :一个分析方法的 范围是样品中分析物高浓度和低浓度的区间,对此 范围已经证明该分析方法满足所需的精密度、准确 度和响应函数。 残留(carry over) :残留是在高浓度分析物样 品分析后,空白样品中出现的分析物信号峰。 已测样品(incurred samples) :来自给药的受试 者的试验样品。 已测样品再分析(incurred sample reanalysis) : 分析一部分已测样品,确定原来的分析结果是否可 以重现。 定量下限(LLOQ) :一个分析方法的定量下限 是样品中分析物的最低含量,可以定量测定并达到 预定的精密度和准确度。

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基质效应(matrix effect) :由于样品中存在不 希望的分析物或其他干扰物质,导致响应发生直接 或间接的变化或干扰。 精密度(precision) :一个分析方法的精密度表 示在预定的条件下获得的一系列测量值之间的接近 程度(分散度) 。 质控样品 (quality control sample) 加入分析物 : 的样品,用于监测生物分析方法的性能和评估每个 分析批未知样品测定结果的完整性和可靠性。 响应函数(response function) :一个分析方法 的响应函数是在给定范围内获得检测结果的能力, 该结果与样品中的分析物浓度(含量)成正比。 选择性(selectivity) :选择性是生物分析方法 在可能的组分存在下,测量和区分分析物的能力。 定量上限(ULOQ) :一个分析方法的定量上限 是样品中分析物的最高含量,可以定量测定并达到 预定的精密度和准确度。
[8] 参考文献 [1] US Food and Drug Administration, Center for Drug [5] [6] [7] [4] [3] [2]

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