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遗传学实验报告


专题一:植物专题 实验一 植物细胞有丝分裂的制片与观察 摘要: 本实验选取大蒜作为实验材料, 通过对大蒜根尖的培养取得生长旺盛的植物分生组 织, 然后对根尖细胞进行前处理、 固定、 解离、 染色、 压片来观察细胞有丝分裂的全过程。 关 键词:有丝分裂 间期 前期 中期 后期 末期 abstract: in this experiment, we chose allium sativum as the material. we got a lot of activity floristic cells through cultivating the roots of allium sativum. then we disposed the cells in order to observe the whole processes of the mitosis. key words: mitosis interphase prophase metaphase anaphase telopha 实验原理 有丝分裂是植物体细胞进行的一种主要分裂方式。 有丝分裂的目的是增加细胞的数量而使 植物有机体不断生长。在有丝分裂过程中,细胞核内的物质能准确的进行复制,然后有规律 的均匀分配到两个子细胞中去。植物有丝分裂主要在根尖、节间、茎的生长点、芽及其他分 生组织里进行。将生长旺盛的植物分生组织经取材,固定、解离、染色、压片,可以观察到 细胞有丝分裂的全过程。 实验用品 大蒜(allium sativum 2n=16) ,carnoy 固定液(由 95%的乙醇和冰乙酸以 3:1 的比例配 置),1mol/l 的 hcl,石炭酸品红,水浴锅,显微镜,剪刀,矿泉水瓶,蒸馏水 实验步骤 1 生根、取材与固定 采用水培法于暗处使大蒜生根,每天换水两次。4 天后,根长至 2.0cm 左右。上午 10:00 用剪刀将根尖剪下, 并直接放入固定液中固定, 以保持细胞真实的生活状态,避免操作过程中 对细胞生活状态的破坏。本次实验固定时间为 14h。 2 解离与水洗 本次实验采用了酸解法使细胞散开。将 1mol/l 的 hcl 放入 60℃的恒温水浴锅中,将固定 好的根尖放入.解离 4min。用清水冲洗解离后的材料 5 次,洗去表面的 hcl,并引起后低渗, 利于压片。 3 染色、压片与镜检、拍照 截取根尖上分生组织 1/3 左右于载玻片上, 用镊子将分生组织碾碎; 滴上石炭酸品红染色 5min。染完后,盖上盖玻片,用解剖针轻敲盖玻片几次,以增强细胞扩散程度。 实验结果 通过上述实验方法获得了一系列分裂的照片,如图ⅰ-1 所示。从这一系列图片我们可以 看到有丝分裂是一个连续的过程,各期的特征如下所述: 间期(interphase) :图ⅰ-1(a)所示,有丝分裂间期染色体以染色质形式存在,染色 质缠绕成丝状的无规线团。 前期(prophase) :图ⅰ-1(b)所示,染色体螺旋化,由无规线团逐渐变成比较清晰的染色 体,核膜核仁消失。 中期(metaphase) :图ⅰ-1(c)所示,染色体在分裂中期有序地排列在赤道板上,数目清 晰,是染色体形态观察的最佳时期。 后期 (anaphase) : 图ⅰ-1(d)所示, 姐妹染色单体开始分离并在纺锤丝的牵引下移向两极。 末期(telophase) :图ⅰ-1(e)所示,染色体继续走向两极,同时染色体也开始解螺旋,由染 色体状态逐渐变为无序线团,核膜核仁复现。 讨论 1、大蒜根尖的固定时间在上午 9:00-11:00 和下午 15:00-17:00 为最佳。因 为此时是大蒜分裂的高峰期。 2、解离的时间要适当,大约 4min,因为解离时间的长短与实验结果的好坏有非常直接的

影响,时间过长,则不仅破坏分生组织之间的果胶与纤维素等物质,也使分生组织与伸长区 脱离,染色效果将会降低,而过短,则又达不到分离细胞的结果。 3、在切取根尖时大约切从根尖开始算往上 1.5mm 左右,若切得太短,则只会看到成熟的 根冠细胞,在视野中看不到分裂期细胞;若切得太长,则会看到有很多伸长区的成熟细胞, 从而影响实验结果。 4、染色时间不宜过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。 5、压片时用拇指从上往下垂直用力且要避免载玻片与盖玻片之间的滑动,否则会使细胞 之间重叠,影响观察。 6、观察时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观察 实验二 植物细胞减数分裂的制片与观察 摘要:本实验选取玉米雄花作为实验材料,首先将已固定好雄花的花药剥离出来,然后通 过对花粉母细胞进行解离、染色、压片来观察细胞减数分裂的全过程。 关键词:减数分裂 细线期 偶线期 粗线期 双线期 终变期 abstract: in this experiment, we chose zea mays as the material. we got a lot of cells in meiosis. then we disposed the cells in order to observe the whole processes of the meiosis. key words: meiosis leptonema zygonema pachynema diplonema diakineses 实验原理 减数分裂是生物在形成配子时的一种特殊的分裂方式, 是在性母细胞中进行的。 减数分裂 产生的每个子细胞染色体数目减少一半。并且第一次分裂前期特别长,其变化特别复杂,包 括同源染色体配对、交换与分离等。 实验用品 玉米雄花(zea mays 2n=20), carnoy 固定液(由 95%的乙醇和冰乙酸以 3: 1 的比例配置), 铁矾,苏木精,恒温箱,冰乙酸,酒精灯,显微镜 实验方法 1、 取材与固定(指导老师完成) 采集处于减数分裂时期的玉米雄花,采集时间为上午 8:30-10:30 和下午 2:00-4: 00。采集的雄花直接放入新配制的 carnoy 固定液中固定一周(中间换固定液两次) 。 2、 花药剥离 减数分裂是同步分裂, 由于每朵小花中的所有花药都处于同一时期, 因此剥离的量要充足, 以便在实验中能进行选择。 3、 媒染、复染花药 在不伤害花药的前提下,使用镊子与解剖针玻璃花药并放入 4%硫酸高铁铵(铁矾)水溶 液中进行媒染,时间为 4-24h。媒染后,彻底水洗除净花药表面的铁离子。之后放入 0.5% 的苏木精中染 4-24h。在 25℃温箱中进行。染完后再次彻底水洗。除去表面染料。 4、 制片、镜检与拍照 取一枚花药于载玻片上, 滴上一滴 45%冰乙酸, 并在酒精灯上加热 5 秒钟。 材料加热之后, 盖上盖玻片,用滤纸折叠成两层盖在盖片上,进行压片。 实验结果 通过上述实验方法得到以下图ⅰ-2: 讨论 1、 在花药剥离时要注意将颖片剥离干净,使用的镊子和解剖针不可伤害花药,否则花粉 母细胞会从伤口处外流,影响实验效果 2、 在挑选花粉粒的时候,应挑选粒大且饱满的,粒小而瘪的花粉往往发育不良。

3、 媒染时间不宜过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。 4、 压片时用拇指从上往下垂直用力且要避免载玻片与盖玻片之间的滑动, 否则会使细胞 之间重叠,影响观察。 5、 观察时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观察 6、 减数分裂过程是一个连续的过程,各时期之间没有明显的界限,只要符合这个时期的 特征便可作为此时期的分裂相。 实验三 植物细胞多倍体诱导的制片与观察 摘要: 本实验选取大蒜作为实验材料, 通过在培养液中施加秋水仙素的方法培养大蒜根尖 细胞从而对其进行多倍体诱导,然后对根尖细胞进行固定、解离、染色、压片来观察细胞染 色体加倍后的分裂相。 关键词:多倍体 秋水仙素 abstract: in this experiment, we chose allium sativum as the material. we got a lot of activity floristic cells through cultivating the roots of allium sativum. then we put colchicine into the water. after about 36 hours, we disposed the polyploid cells in order to observe themselves. key words: polyploidy colchicine 实验原理 多倍体是指细胞核内具有两个以上染色体组, 它的产生出了自然发生外还可人工诱导。 诱 导多倍体的方法有多种,本实验采用秋水仙素诱导。它主要作用于细胞分裂过程中纺锤体的 形成,使细胞分裂后期染色体不能分向两极而被阻截在中期,经过间期染色体复制,使染色 体数目加倍。 实验用品 大蒜(allium sativum 2n=16) ,carnoy 固定液(由 95%的乙醇和冰乙酸以 3:1 的比例配 置,秋水仙素,1mol/l 的 hcl,石炭酸品红,水浴锅,显微镜,剪刀,矿泉水瓶,蒸馏水 实 验方法 1、 生根与秋水仙素处理 采用水培法培养大蒜,直至根长约 2.0cm。向培养液中加入浓度为 0.1%的秋水仙素,培 养 36~48h。待根尖膨大时可取材固定。 2、 固定、解离(同有丝分裂过程) 3、 制片 取根尖分生组织一部分放在一洁净的载片上, 先用解剖针把材料碾碎并铺展开, 然后滴上 一滴石炭酸品红染色 5min,盖上盖片,进行压片。 实验结果 通过以上实验方法,制取了图ⅰ-3。 (a) (b) 图ⅰ-3 大蒜的染色体图(白点示着丝点)图(a):2n=16,是未加倍的大蒜细胞中的染色 体。 图(b):4n=32,是经秋水仙素加倍后的大蒜细胞染色体。 讨论 1、 染色体加倍的倍数多少与秋水仙素作用的时间有关。若让染色体数目加倍,秋水仙素 处理的时间应大于等于细胞的一个分裂周期。如果浸泡的时间大于细胞周期的二倍,则会出 现八倍体。若感兴趣,可适当延长处理时间,观察实验结果。 2、 不应该观察到 32 条染色体就认定此细胞为四倍体, 因为染色体为 2n 细胞的分裂后期 染色体数也为 32 条,此时的染色体不含姐妹染色单体。而染色体为 4n 的细胞中期,含有 32 对姐妹染色单体。

3、 若大蒜根尖细胞被加倍,其尖端部膨大,是认定细胞加倍的理由之一。 4、 大蒜根尖的固定时间在上午 9:00-11:00 和下午 15:00-17:00 为最佳。因为此 时是大蒜分裂的高峰期。 5、 解离的时间要适当,大约 4min,因为解离时间的长短与实验结果的好坏有非常直接 的影响,时间过长,则不仅破坏分生组织之间的果胶与纤维素等物质,也使分生组织与伸长 区脱离,染色效果将会降低,而过短,则又达不到分离细胞的结果。 6、 在切取根尖时大约切从根尖开始算往上 1.5mm 左右,若切得太短,则只会看到成熟的 根冠细胞,在视野中看不到分裂期细胞;若切得太长,则会看到有很多伸长区的成熟细胞, 从而影响实验结果。 7、 染色时间不宜过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。 8、 压片时用拇指从上往下垂直用力且要避免载玻片与盖玻片之间的滑动, 否则会使细胞 之间重叠,影响观察。 9、 观察时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观察 专题二:果蝇专题 实验一 果蝇唾腺染色体的观察 摘要:果蝇(drosophila melanogaster)是研究遗传学的经典材料,它的染色体数目是 2n=8,易于观察,尤其是果蝇三龄幼虫阶段的唾腺染色体,其唾腺染色体巨大,又称巨染色 体。本实验通过对果蝇唾腺染色体进行处理和观察来探求染色体的结构。 关键词:果蝇 唾腺染色体 abstract: drosophila melanogaster is a classic material of studying genetics. as we all know, drosophila melanogaster has a 2n number of 8, which means we could easy to observe it. especially for its larval salivary chromosome, it is very huge and clear. so it is called huge chromosome. in this experiment through the observation of the salivary chromosome to explore the structure of chromosome. key words: drosophila melanogaster salivary chromosome 实验原理 果蝇三龄幼虫阶段的唾腺染色体处于体细胞同源染色体的配对状态,多次复制而不分开, 因而形成比一般体细胞根染色体长 100-200 倍的不螺旋的巨大染色质,又称为多线染色体, 此 外上面还常能看到带纹。本实验即观察唾腺染色体的特征。 实验用品 黑腹果蝇(drosophila melanogaster) ,培养基,生理盐水,解剖针,蒸馏水,石炭酸品 红,载玻片,hcl 溶液(1mol/l),显微镜 实验方法 1、 三龄幼虫的培养实验前将果蝇放入新培养基培养,23℃-25℃,十天左右。 2、 解剖幼虫 把载玻片置于双筒镜下。载玻片上滴加生理盐水一滴,取三龄幼虫放在其中,操作者两手 各握一枚解剖针, 左手解剖针压住幼虫后端 1/3 处, 固定幼虫。 右手的解剖针按住幼虫头部, 用力向右拉,把头部从身体拉开,唾腺随之而出,唾腺是一对透明的棒状腺体。 3、 解离 在载玻片上除去幼虫其他组织部分, 还要把唾腺周围的白色脂肪剥离干净, 再把唾腺移到 干净的、预先准备的滴有 1mol/lhcl 的载玻片上,解离 2-3 分钟。 4、 水洗 蒸馏水洗涤 3-4 次。 5、 染色压片

石炭酸品红染色 5 分后盖上盖玻片,压片,吸去多余染液。 6、 显微镜观察 先于低倍镜下观察,寻找细胞,再于高倍镜下观察染色体形态特点。唾液腺染色体约 5 条长臂, 点状染色体附着在染色中心附近, 很难看到。 在染色体臂上有深浅不一、 宽窄不同、 粗细不同的带纹。 1 实验结果 通过上述实验方法获得了图ⅱ-1。 讨论 1、 在挑选幼虫时,要挑选个体相对较大,活动能力相对较强的个体。 2、 在解剖时,头部解剖针的位置大约在果蝇的眼睛处,后端部解剖针的位置为果蝇身体 的 1/3 处。在拉伸果蝇的时候力度要适当,肠管、神经管等全部戳断从而影响视线。 3、 果蝇的一对唾腺染色体为白色透明状,是其区分与其他部位的一个明显特征。 4、 在压片的时候应垂直按压,且不要使载玻片与盖玻片之间发生滑动。在压片的时侯力 度要适当,防止将其唾腺染色体压断。 实验二 果蝇的三点测交实验 摘要:果蝇(drosophila melanogaster)是研究遗传学的经典材料,因为它容易采集、 培养;它繁殖率高,生活周期短,一般 10-14 天能繁殖一代;它的染色体数目是 2n=8。本 实验选取果蝇为实验材料了解其饲养条件,性状识别,观察完成三点测交的研究。 关键词:果蝇 三点测交 abstract: drosophila melanogaster is a classic material of studying genetics. firstly, it is easy for us to collect and to feed. secondly, as we all know, drosophila melanogaster has a 2n number of 8, which means we could easy to observe it, furthermore, it also has numerous of gene mutations. finally, its biocycle is very short,therefore it can generate a generation in only 10-14 days. in this experiment we performed the three-point mapping in drosophila melanogaster. key words: drosophila melanogaster three-point mapping 实验原理 两个基因在同一条染色体上呈链锁状态时基因间经常发生互换, 交换之可作为两基因间的 距离。三个基因在一条染色体上时,通过三点测交可确定三个基因在染色体上的位置顺序和 基因间的相对距离。实验用品 黑腹果蝇(drosophila melanogaster) ,野生型形状为红眼(+) 、长翅(+) 、直刚毛(+) ; 三隐性突变型为白眼(w) 、短翅(m) 、卷刚毛(sn) 。 恒温箱,培养瓶,显微镜,乙醚 实验方法 1、 实验果蝇的培养(指导老师完成) 分别培养两种果蝇,7-8 天后,出现幼虫,去亲本。 2、 选择亲本 特征 雄蝇 雌蝇 个体 小 大 腹部条纹 3 5 腹部末端 圆 尖 性梳 有 无 性状选择 红眼、长翅、直刚毛 白眼、短翅、卷刚毛 (一定要为处女蝇)

3、 亲本杂交 把挑选的雌雄果蝇分别放入同培养瓶内进行杂交,每瓶 3-5 对。培养瓶放入 25℃恒温箱 培养。 4、 去除亲本 果蝇杂交 7-8 天后,见到 f1 幼虫和蛹出现,去除亲本。 5、 观察 f1 代果蝇性状 再过 4-5 天,检查 f1 代成蝇性状。理论上雌蝇全部是红眼,长翅,直刚毛,基因型为 杂合的;雄蝇全部是白眼、短翅、卷刚毛。 6、 测交 从 f1 中选出 3~5 对果蝇放入同培养瓶内进行杂交, 培养瓶放入 25℃恒温箱培养 7~8 天, 见到有蛹出现时去亲本。 7、 f2 代果蝇的观察与统计 待蛹羽化成成虫时,通过观察其刚毛形态,眼睛颜色,翅膀大小来确定 f2 代的表型。 实 验结果 1、 f2 代果蝇的统计与分析 用于测交的雌果蝇是三个基因的杂合体, 减数分裂形成配子时, 同源染色体之间又发生交 换的可能,任何两个基因之间都有可能发生交换;雄性果蝇只产生两种配子,这两种配子只 对 f2 代的果蝇有性别影响,没有性状上的影响,所以代的表型有 8 种,其中 6 种是重组合, 2 种是亲组合。 测交后代表型 观察数 重组发生在 m-sn sn-w m-w + + + 102 0 0 0 + + sn 10 10 10 0 + m + 29 29 0 29 + m sn 22 0 22 22 w m sn 42 0 0 0 w + + 42 0 42 42 w + sn 27 27 0 27w m + 19 19 19 0 总计 85 93 120 293 2、 三点测交图距 讨论 1、 在观察 f1 代果蝇的性状时,若观察结果与理论相符,即雌蝇全部是红眼,长翅,直 刚毛且雄蝇全部是白眼、短翅、卷刚毛,实验可继续进行。假如不是预期结果,实验不能盲 目往下进行。 2、 观察要勤,要及时去除亲本,防止子代和亲代杂交,影响实验结果。 3、 在开始挑选亲本时,乙醚的量要适当,防止因剂量过大造成亲本死亡。判断果蝇是否 死亡主要看其翅膀是否向上翘起,若向上翘起则表明果蝇已经死亡。 4、 在转换培养基的过程中,若果蝇不幸飞出则要立即处死,绝不能手软,防止造成实验 室其它果蝇的污染。 专题三:动物专题 实验一 小鼠骨髓细胞染色体的制片与观察

摘要:小鼠(mus musculus 2n=40)繁殖周期短,繁殖能力强,是研究分子以及遗传学的 经典实验材料。本实验采用小鼠骨髓细胞作为实验材料,因具有旺盛的分裂能力,通过对其 进行离心、低渗、固定、滴片、染色来观察其染色体的形态结构。 关键词:骨髓细胞 染色体 abstract: mus musculus , whose cells in bone marrow have a powerful energy in division,is a classic material in learning genetics. in this experiment, we chose the bone-marrow-cell as the material. we got a lot of activity cells from its bone marrow. then we disposed theh cells in order to observe the structure of the chromosome. key words: bone marrowchromosome 实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式, 是染色体紧密包装的结果。 此时染色体 达到最大收缩,具有典型的形态。小鼠骨髓细胞具有旺盛的分裂增殖能力,把秋水仙素注入 小鼠体内,破坏细胞分裂过程中的纺锤体形成,把分裂固定在中期。将小鼠解剖,取出骨髓 细胞,经低渗、固定、滴片、染色等处理之后,可观察到小鼠的染色体。 实验用品 小鼠(mus musculus) 、秋水仙素溶液、生理盐水、低渗溶液、giemsa 磷酸缓冲液,离心 机,解剖剪,烧杯,显微镜,甲醇-冰醋酸(1:1)固定液 实验方法 1、 药品的配制(由指导老师完成) 秋水仙素溶液:称 10mg 的秋水仙素,用 100ml 生理盐水溶解 生理盐水:8.5gnacl,溶解在 1000ml 蒸馏水中,浓度是 0.85% 低渗溶液:5.59gkcl,用 1000ml 蒸馏水溶解,浓度是 0075% 2、 秋水仙素的注射(由指导老师完成) 按每克体重约 5μ g 的剂量, 在处死小白鼠前 2h 经腹腔注射秋水仙素。 秋水仙素的作用是 破坏细胞分裂中纺锤体的形成,积累细胞中期分裂相。3、 解剖小鼠 颈椎脱臼法处死小白鼠, (用手捏住小白鼠头的后部,并用力下压;另一手抓住鼠尾,用 力向后上方拉,便可使小白鼠的颈椎脱臼,瞬时死亡)立即取下两后肢连同关节头的股骨和 胫骨,剔净其上的肌肉。收集骨髓细胞 用 2%柠檬酸钠溶液洗净股骨和胫骨,剪去关节头, 暴露骨髓腔。 将吸有适量 2%柠檬酸钠溶液的注射器的针头从股骨和胫骨的一端插入骨髓腔中, 用 2%柠檬酸钠溶液将骨髓吹洗入离心管中,反复冲洗至骨髓腔呈白色为止。 4、 离心 离心管配平后,1000r/min 离心 10min,弃去上清液。 5、 低渗处理 向细胞沉淀中加入 5ml 低渗液轻轻敲打离心管底部,使其充分接触,并在 37℃水浴中低 渗处理 20min。 6、 固定 低渗处理后,1000r/min 离心 10min,弃去上清液,沿管壁加固定液,立即将细胞团吹散 打匀,静置 15min,然后离心。重复一次。 7、 制细胞悬浮液 视离心管底细胞多少再加入甲醇-冰醋酸(1:1)固定液 2-3 滴,吹打成悬液。 8、 滴片 将载玻片在洁净冰水中预冷,取出后平放在桌面。用吸管吸取 2 滴细胞悬液,从载玻片上 方适当高度处滴到载玻片 1/3 和 2/3 处,并立即对载玻片上的细胞悬液吹气,将细胞悬液吹

散吹匀,然后置空气中自然干燥。 9、 染色 载玻片充分干燥后,平放,用新鲜配制的 1:10 的 giemsa 磷酸缓冲液覆盖载玻片,染色 10min,流水缓缓冲去多余染液,再用吸水纸吸干多余水分,晾干后即可镜检。 10、 镜检 采用“弓”字形观察法,即保证不漏掉每一个细胞。 实验结果 根据上述实验方法,得到了图ⅲ-1,从图中可以清晰地看到小鼠的染色体数为 2n=40,且 全部为端着丝点。 讨论 1、 在取骨髓细胞时, 应将胫骨两端切掉, 使之相通。 在用生理盐水冲洗时应从上往下冲, 并且反复冲洗,直至红色褪去为止。 2、 在滴片的时候为了让细胞破裂、 分散得更好, 滴管与载片之间应保持至少 1m 的距离, 让细胞摔破。因本人在滴片的时侯距离不够长,从而导致细胞没有破裂,从而没有观察到预 期的结果。 (上图摘自同组同学孙海汐的图片) 3、 滴完片子后,一定让片子自然干燥后才能染色,否则细胞和染色体会漂浮在液面上, 水洗时会被冲掉,影响实验效果。 4、 染色时间大约为 15min 左右,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。 实验二 人染色体的制片与观察 摘要: 人的外周血中含有丰富的处于分裂间期的淋巴细胞, 当经过特殊刺激可使其进入分 裂期,再用秋水仙素处理便可得到大量中期分裂相的细胞。本实验采用人外周血作为实验材 料,通过对其进行离心、培养、秋水仙素处理、低渗处理、预固定、二次固定、滴片、giemsa 染色处理来观察其染色体的形态结构。 关键词:外周血细胞 染色体 abstract: there are a lot of homeocyte in human blood, which can access to cell division when given a irritation. in this experiment, we chose human blood cell as the material. we got a lot of activity cells from it. then we disposed theh cells in order to observe the structure of the chromosome. key words: blood cell chromosome 实验原理 人体外周血中的淋巴细胞几乎都处于分裂间期。 当在培养基中加入植物性血球凝集素 (pha) 时,这种淋巴细胞受到刺激转化为淋巴母细胞,进入分裂期。经过短期培养后,用秋水仙素 处理就可获得大量处于分裂中期的细胞,制片后可以清楚地对染色体进行观察。 实验用品 人外周血、 肝素、 giemsa 染液、 双抗、 磷酸缓冲液 pbs、 秋水仙素、 植物性血球凝集素 (pha) , 培养基, 小牛血清, 青霉素, 链霉素, m199, 离心机, 甲醇-冰醋酸(3: 1) 固定液, 显微镜 实 验方法 1、 无菌处理(指导老师完成) 所有用器药品均应消毒,培养基、pha、双抗用过滤方式灭菌。 2、 培养基配制(指导老师完成) 取 m199 4ml,小牛血清 1ml,青霉素、链霉素 0.04ml,肝素 3-4 滴,pha0.3ml 置于培养 瓶中。 3、 采血 无菌条件下静脉取血 0.2-0.3ml 放入培养液中。 4、 培养

细胞在 37℃温箱中培养 72h,期间经常摇动培养瓶。 5、 秋水仙素处理 培养 68h 左右,加入秋水仙素溶液,以获得较多的中期相,摇匀后,继续培养 44h,可进 行染色体制片。 6、 低渗处理 培养物倒入离心管中,1000r/转 离心 8 分钟去掉上清液,沉淀物为红细胞和白细胞,然 后加入少量预热 37℃的 0.075m kcl,小心用吸管吹气混匀后,放入 37℃恒温箱中低渗 20 分 钟左右,低渗的作用在于使红细胞破碎,白细胞膨胀破裂,最终导致染色体分散。 7、 预固定 加入 1ml 新配制的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液,均匀后立即以 1000r/转离心 7 分钟,用 吸管吸去全部上清液,轻弹离心管底部,使沉淀成糊状。 8、 第一次固定 加入 5ml 固定液, 用吹管吹打均匀, 固定 15 分钟, 以 1000r/转离心 7 分钟, 去掉上清液。 9、 第二次固定 重复上述操作过程,去掉上清液,视管底细胞多少加入新鲜固定液,制成悬浮液。 10、 滴片 玻片洗净后放于冰箱中冰冻,滴片时用吹管吹取细胞悬浮液,滴于载片上,滴片高度应少 高些,每张片滴 1-3 滴,滴后用嘴吹,有助于细胞分散,滴片后斜放,在空气中干燥 11、 giemsa 染色 取 1-2 张片,用 giemsa 染液和磷酸缓冲溶液配成 1:10 的工作液,滴于载片上染色 15 分 钟,自来水冲洗后镜检。实验结果 通过上述实验方法,得到图ⅲ-2。从图中可以清晰地看到人的染色体数为 2n=46。 讨论 1、 在滴片的时候为了让细胞破裂、 分散得更好, 滴管与载片之间应保持至少 1m 的距离, 让细胞摔破。此次实验吸取上次实验的教训,所以获得了较为成功的制片。 2、 滴完片子后,一定让片子自然干燥后才能染色,否则细胞和染色体会漂浮在液面上, 水洗时会被冲掉,影响实验效果。 3、 染色时间大约为 15min 左右,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。 4、 在取血时,手一定要轻,防止红血细胞混到血清中。 5、 加固定液时,一定要边加边用食指弹拨离心管,让细胞充分散开,防止细胞聚集。 实验三 人染色体的分带染色法 摘要: 染色体分带技术是鉴定单个染色体和染色体组的一种手段, 它利用特殊的染色方法 使染色体产生明显的染色的暗和染色的命带相间的带型形成了鲜明的染色体个体性,本实验 因用吉姆萨染液,故称为 g-带。 关键词:吉姆萨染液 胰蛋白酶 abstract: the technology of detaching chromosome band is an important method to identify each chromosome or chromosome set through using special colorant. because it can make the chromosome show two kinds of different belts. in this experiment we use giemsa, so it can be called g-belt. key words: giemsa trypsase 实验原理 人染色体经过胰蛋白酶处理后,染色体上的蛋白质被酶水解只留下裸露的 dna,在吉姆萨 染液的过程中,不同的碱基在吉姆萨中着色深浅不同,因此会看到颜色深浅不一的带纹。 实 验用品 吉姆萨染液 pbs 胰蛋白酶溶液

实验步骤 1、 胰蛋白酶处理 将上次试验制得的人染色体的片子取出在室温下将玻片标本浸入胰蛋白酶工作液中处理 25 秒左右。 2、 漂洗 再在 pbs 中漂洗 30 秒。 3、 染色 在 giemsa 染液中染 7 分钟左右。 4、 水洗 玻片标本在细流自来水下冲洗直至水流不再有颜色为止, 在冲洗标本时, 不要冲洗标本的 正面,以防染色体被水流冲洗掉,空气干燥。 5、 镜检 采用“弓”字形观察法,即保证不漏掉每一个细胞。 结果 通过上述实验方法,得到图ⅲ-3。从图中可以清晰地看到人的染色体数为 2n=46,且有明 显的带纹. 讨论 1、 玻片标本在胰蛋白酶溶液处理前须在 37℃温箱内处理 4 天左右,才可以得到满意的 结果。 2、 用胰蛋白酶处理染色体的时间要恰当,方可使染色体外表面的蛋白质水解。 3、 染色时间不要太长,以防因时间过长而导致染色体没有明显分带,所有染色体染色过 深。 4、 在挑选染色体时,尽量挑选染色体比较长的,这样使分带更加明显。 实验四 dna 的粗提取 摘要:鸡血红细胞与人的红细胞不同,存在细胞核,当中含丰富的有 dna,而且鸡血细胞 极易吸水胀破。 本实验以鸡血为实验材料, 利用 dna 在不同浓度的 nacl 下溶解度不同的方法 来粗提取 dna。 关键词: dna 红细胞 abstract: different from human blood, the red blood cell in chick has nucleus, where there are numerous of dna. in this experiment we chose the chick blood as the material and disposed it in order to abstract the dna. key words: dna red cell 实验原理 鸡血红细胞与人的红细胞不同,存在细胞核,当中含丰富的有 dna,而且鸡血细胞极易吸 水胀破。首先破坏细胞膜,然后通过高速离心,由于 dna 的分子量较大,所以会下沉,这样 重复多次可得到较粗的 dna。 而后利用 dna 在不同浓度的 nacl 下溶解度不同的方法来粗提取 dna。 实验用品 10%柠檬酸钠、2mol/l nacl 、二苯胺、0.15 mol/l nacl、pbs、离心机、冰乙醇、纱布、 蒸馏水、玻璃棒、鸡血、烧杯 实验方法 1、 取鸡血 杀活鸡取鸡血, 同时放入抗凝剂柠檬酸钠溶液。 具体制备方法如下: 取质量浓度为 0.1g/ml 的柠檬酸钠溶液 100 ml,置于 500 ml 烧杯中,注入新鲜的鸡血(约 180 ml) ,同时用玻璃棒

搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免血液凝结。 2、 离心 将血液倒入离心管内进行离心,用 1000 r/min 离心 5min,使血细胞沉淀于离心管底部。 3、 破碎细胞,释放 dna 鸡血细胞中的 dna 与核蛋白结合, 位于鸡血细胞的细胞核中, 正常情况下是不会释放出来 的。为了使 dna 从细胞核中释放出来,需要向鸡血细胞液中加入蒸馏水,并且搅拌,从而使 血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌,但 也不能太快太猛,防止打碎 dna。一般 5-10 ml 的鸡血细胞液加入 20 ml 蒸馏水搅拌 5 min。 释放出来的大量 dna 和 rna 往往与蛋白质结合在一起,用单层纱布进行过滤,除去一些颗粒 较大的杂质。 4、 溶解细胞核内的 dna 在浓度较高的 nacl 溶液中核蛋白容易解聚,游离出的 dna 溶解在溶液中。在溶液中加入 40-60 ml 体积浓度为 2mol/l 的 nacl 溶液,搅拌 1min。 5、 dna 的析出 将溶液中的 dna 与其他杂质分离,加蒸馏水降低 nacl 溶液浓度,使 dna 析出。缓慢贴壁 加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于 dna 分子的附着和缠绕。使 nacl 溶液的终浓度为 0.1-0.2 mol/l。加水过程分多次进行,当总加水量为 80ml 左右时,dna 已 基本析出。用 2 层纱布对 dna 稀释液进行过滤,滤去蛋白质,收集 dna 的黏稠物。 6、 dna 的初步纯化 将 dna 黏稠物再溶解,继续用 2 mol/l 的 nacl 溶液 20 ml 溶解 dna 黏稠物,仍旧沿一个 方向不停搅拌,使 dna 充分溶解,以免损失。用 2 层纱布进行过滤,滤去杂质,收集含有 dna 的滤液。向滤液中贴壁缓慢加入等倍体积的冰乙醇,并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅 拌,溶液中会出现 dna 丝状物,卷起。用 0.02mol/l 的 nacl 溶液 1ml 溶解丝状物,并加入二 苯胺。 7、 dna 的鉴定 同时将对照组(只含二苯胺试剂)与实验组水浴加热进行显色反应。 实验结果 经过一段时间后实验组溶液变蓝,对照组溶液颜色不变。 讨论 1、 在取鸡血的时侯,同时用玻璃棒进行搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免血 液凝结。 2、由于溶液中 dna 含量较少, 过滤时应在不溢出的基础上, 使滤液尽可能多地透过纱布, 尽量避免浪费。 3、 实验中应以同一方向搅拌溶液,以避免 dna 被打断。 实验五 血影的制备 摘要:鸡血红细胞与人的红细胞不同,存在细胞核.本实验以活鸡血为原料通过多次的离 心,学会粗略的提取细胞膜的方法。 关键词: 细胞膜 红细胞 abstract: different from human blood, the red blood cell in chick has nucleus. in this experiment we chose the chick blood as the material and disposed it in order to abstract the cell membrane. key words: cell membrane red cell 实验原理 鸡血细胞的细胞膜具有选择透过性,较大的物质一般情况下不会从细胞膜透出。若采用 5p7.6 溶液作用于细胞,便可以改变细胞膜的通透性,使其通透性增大,从而可以通过高速

离心的方法使与细胞质分离,制备血影。 实验用品 10%柠檬酸钠,pbs,5p7.6 溶液 实验方法 1、 离心 取 10ml 血液加入 2 倍体积的 pbs,装入离心管进行 1000r/min,时间为 5 分钟的离心。 2、 取沉淀,再次离心 倒出上清液,重复第一步 3、 混合 沉淀中加入 20 倍体积的 5p7.6 溶液,混合均匀后在常温中静置 25min 4、 离心 取 10ml 装入离心管进行 15000r/min,时间为 20 分钟的离心。 5、 镜检 去掉上清液,取出红色沉淀上层,在显微镜下进行观察。 实验结果通过上述实验方法,得到了图ⅲ-4 讨论 1、 在取鸡血的时候,同时用玻璃棒进行搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免血 液凝结。 2、 在加入低渗液时,一定要边加边搅拌,使红细胞与低渗液充分接触。 3、 在取细胞膜的时候,要取最上表层,不要取得过多。防止细胞内容物影响实验结果。 专题四:链孢霉的杂交及四分子分析 摘要:粗糙链孢霉(nerospora crassa)属真菌类,是进行四分子遗传学分析的好材料。 本专题选取粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型和野生型为实验材料,对杂交所得后代的表现型进行观 察分析,进而了解顺序排列的四分体的遗传学分析方法。 关键词:链孢霉 交换 abstract: nerospora crassa is a good material to tetrad analysis. in this experiment we observed the second division segregation of gametogamy by the lys+ and lys-. then we analyzed the results in order to calculate the distance between the gene and the centromere. key words: nerospora crassa, crossover 实验原理 粗糙链孢霉 (nerospora crassa) 的菌丝体是单倍体, 每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。 粗糙链孢霉的菌株有两种不同的接合型,它们受一对等位基因控制。不同接合型菌株的细胞 接合产生有性孢子,这过程称为有性生殖。通过对粗糙链孢霉的赖氨酸缺陷型和野生型杂交 所得后代的表现型的分析,了解顺序排列的四分体的遗传学分析方法,进行有关基因的着丝 粒距离的计算和作图。 实验用品 粗糙链孢霉 (nerospora crassa) ,琼脂、 蔗糖、 赖氨酸、 玉米粒、 土豆、 5%次氯酸钠 (naclo) , 实验方法 1、 制备培养基(由指导老师完成) 1.1 野生型菌株培养基 将马铃薯洗净去皮取 200g,加水 1000ml,煮熟,然后用纱布过滤,弃去残渣,滤 2%琼 脂,20g 蔗糖,煮融,分装到试管中。而后在 8 磅压力下消毒 30 分钟,取出成为斜面备用。 1.2 培养缺陷型菌株培养基

制作方法与野生型菌株的培养基相同。 成分如下: 土豆 200g, 蔗糖 20g, 琼脂 20g,配 1000ml 加入 20ml 赖氨酸 1.3 杂交培养基 将玉米在水中浸软,破碎,每试管放 2-3 粒,加入少量琼脂(0.1 克左右) ,再放入一小 片经多次折叠的滤纸(长约 3-4 厘米) ,加上棉塞,消毒,不需摆斜面 2、 菌种活化(由指导老师完成) 为使菌种生长得更好,先要进行菌种活化。把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰箱中取出, 分别接在两支完全培养基试斜面上,28℃温箱培养 5 天左右。培养到菌丝的上部有分生孢子 产生。 3、 菌种杂交(由指导老师完成) 同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分生孢子或菌丝, 25℃温箱进行混合培养。 在杂交 后 5-7 天就能看到许多棕色的原子囊果出现, 以后原子囊果变大变黑成子囊果, 在 7-14 天左 右,就可在显微镜下观察。4、 制片观察: 取一载玻片,滴 1-2 滴 5%次氯酸钠,然后用接种环从长有子囊果的试管中挑出子囊果放 在载玻片上,用另一载玻片盖上,用手指压片,将子囊果压破,置显微镜下检查。观察子囊 中子囊孢子的排列情况。 实验结果 通过上述方法得到了图ⅳ-1 一般的子囊孢子类型有+ + + + - - - - ;- - - - + + + + ;+ + - - + + - - ; - - + + - - + + ;+ + - - - - + + ;- - + + + + - 名称 表现型 数值 亲本 + + + + - - - - - - - + + + + 94 交换 + + - - + + - - - + + - - + + 23 + + - - - - + + 7 - - + + + + - - 7 重组值=(交换值/总数)*(1/2)=14.1% 讨论 1、 如图ⅳ-1 所示有些子囊中的子囊孢子尚未成熟,全为灰色;有些赖氨酸缺陷型的子 囊孢子也成熟了,全为黑色。 2、 有时观察到的子囊孢子的排列为+ + + + - - + +,+ + - - - - - +,- + - - - + + +,- + + + - - - +,这样的情况的出现是由于基因转变造成的。基因转变的频率因基因位 点不同而异,但一般极低。 3、 在挑选子囊果时要挑选粒大、 饱满而且外壳坚硬的, 否则子囊果不成熟, 外壳不够硬, 子囊孢子不会被压出来。 4、在压片时, 若事先用解剖针在子囊果外壳上刺出缺口, 则会使子囊孢子很容易被压出。 5、 在数子囊孢子时,要从一个方向之另一个方向有规则地数,以免数乱。 6、 压片的力度要适当,避免载玻片与盖玻片之间发生滑动,使子囊孢子相互重叠,影响 观察结果。 参考文献: 《遗传学实验技术》 卢龙斗主编 《遗传学实验方法和技术》 北京大学生物系遗传学教研组编 《遗传学实验原理和方法》 梁学礼主编

《人体及动物细胞遗传学实验技术》 王子淑编著


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