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GST蛋白纯化


GST 的蛋白表达: 转化 BL21,挑菌,酶切验证,接种到 250 ml 的 2YT 带 Amp 的培养基,接种比例一般为 1: 100,每 3 小时测一次。37 度 250 转 3 小时,OD 一般为 0.6-1.5,加 1M IPTG(终浓度为 0.1 mM) 诱导在 30 度 4 小时,5000g 10 分钟收集细胞,晚上冻在-80 度。 裂解: STE 裂解液 (10mM Tris-HCl pH8.0; 150 mM NaCl; 1mM EDTA) , 加 100ug/ml lysozme, 1mM PMSF, 10mMDTT,), 冰上 20min 转动。 加 1%的 triton-100,超声 250s, 12000g 30min 取 上清,12000g20min 再取上清。 纯化: 活化 beads (用 500ul PBS 洗涤 3 次) , 放入上清结合, 室温 2h; 用加入 (1% triton-100, 1mM PMSF, 10mMDTT 0.5-1 M NaCl)的 PBS wash 4 次 elution3 次。 Elution Buffer:100 mM Tris-HCl pH8.0, 1% triton-100,1mM PMSF, 10mMDTT 150 mM NaCl 15mM glutathione) 。


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