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2012-2013《分子生物学实验》试卷


一,填空题(每空 2 分共 20 分)
1,测定 DNA 浓度和纯度的方法通常有 法和 法。 2,1OD 的光密度值相当于双链 DNA 浓度为 。 3 抽提质粒的过程中,由于各种因素的影响,使其可能存在三种构型,电泳中,泳动最快的 是 ,其次 ,最慢的是 。 4,不同来源的限制性内切酶可以切割相同的序列这些酶称为 。 5,只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用 技术可以将这段 DNA 进行百万倍的扩增。 6,连接 Buffer 中含有的 为连接反应提供能量,要尽量避免其反复冻融。 7,细胞的感受态一般出现在生长 期。

二,判断题(每小题 3 分共 30 分)
1,实验测得 A260/A280=1.8 说明提取的 DNA 样品非常纯净。 ( × ) 2,Taq 酶和 DNA 连接酶均需要引物。 ( ×) 3,酶切反应过程中为保证底物完全反应,加入的酶越多越好。 ( ×) 4,提取质粒过程中,加入溶液Ⅱ时不能剧烈振荡。 ( √ ) 5,T4DNA 连接酶只能连接具有粘性末端的序列。 ( × ) 6,在 PH=8.0 时核酸分子带负电荷,向正极移动。 ( √ ) 7,设计引物时,向引物 5'端添加限制性酶切位点,同时应超出限制酶识别位点 2-3 个核苷 酸为宜,作为保护碱基。 ( √ ) 8,用乳糖基因插入失活法,筛选出白色噬菌斑均为重组子。 ( × ) 9,制备感受态细胞时应严格无菌操作,不能离开冰浴条件。 ( √ ) 10,所有的酶均应在其最适反应温度下进行。 ( × )

三,简答题(每小题 10 分共 30 分)
1,SDS 碱裂解法制备质粒 DNA 中三种溶液的生化原理分别是什么?(10 分)

2,移液器的使用中应该注意哪些问题?(10 分)

3,转化时为什么要先在不含抗生素的液体培养基中培养 1 个小时,然后再涂布于含有抗生 素的平板上?(10 分)

四,综合题(20 分)
我们在拟南芥中发现了一个抗旱基因 A,想通过转基因技术把它转到玉米中,提高玉米的抗 旱能力,解决全国缺水导致的玉米减产问题,请结合本课程的实验,设计一个吧 A 基因的全 部序列整合到表达载体 p1300 上得到重组子的详细过程。 (表达载体 p1300 可用 EcolⅠ和 Hind Ⅲ两个酶切位点来酶切,载体抗氨苄青霉素,同时含有 β-半乳糖苷酶的 N 端序列,其 中 EcolⅠ和 Hind Ⅲ两个酶切位点在 β-半乳糖苷酶的 N 端序列的编码区内) 。


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