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改实验后+遗传学实验讲义(新)1


遗传学实验讲义目录

减数分裂. 一. 减数分裂.

果蝇的饲养与形态观察. 二. 果蝇的饲养与形态观察.

果蝇的单因子实验. 三. 果蝇的单因子实验.

果蝇的二对因子的自由组合. 四. 果蝇的二对因子的自由组合.

果蝇的三点试验. 五. 果蝇的三点试验.

果蝇的伴性遗传. 六. 果蝇的伴性遗传.

果蝇唾腺染色体. 七. 果蝇唾腺染色体. 八. X-染色质的观察. -染色质的观察. 九. 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察. 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察.

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实验一

减数分裂

一.实验目的: 实验目的:
通过实验熟练掌握减数分裂时期的主要特征,及染色体行为的动态变化,学 习制片技术。

二.实验原理: 实验原理:
在高等生物中雌雄性细胞形成过程中,首先是由有性组织,如植物的花药和 胚珠、动物的精巢和卵巢中的某些细胞分化为性母细胞(2n) ,这些细胞再进行 连续两次的细胞分离过程,最终形成4个小孢子或精细胞,或分别形成一个大孢 。减数分裂过程的主要特点是,连续两次核 子或卵细胞和三个退化的极体(1n) 分裂,而染色体仅复制一次,最后形成的四个子核,每个核仅含有单倍的染色体 数目,即染色体数减少一半;其次,前期特别长,而且变化复杂,分为细线期、 偶线期、双线期、终变期等,其中包括同源染色体的配对、交换及分离等。 在减数分裂过程中,通过对染色体形态和数量的动态变化的观察,可为遗传 学研究中远缘杂种的分析,染色体工程中的异系鉴别,常规的染色体组型分析以 及遗传学的三个基本规律的论证,提供直接或间接的依据。

三.实验用品: 实验用品:
1. 材料:玉米雄花序,蝗虫精巢等。 2. 用品:镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 3. 药品:改良苯酚品红等。

四.实验方法: 实验方法:
1. 玉米花药涂片: 取合适大小玉米花蕾,放到载玻片上将玉米花冠剥开,使花药显露,去除其 余部分,滴一滴改良苯酚品红于载玻片上,使花药浸在染液中,然后用解剖针轻 压花药,使花粉母细胞挤出,用镊子将花药壁去除掉后,染色5-10分钟,加 盖玻片。 在盖玻片上复一层吸水纸, 用手轻轻下压, 但勿使盖片移动, 即可镜检, 从不同的压片中观察减数分裂不同时期及染色体动态。 2.蝗虫精巢的压片: 用镊子夹取很小一段管状精巢于载玻片上,然后滴加一滴改良苯酚品红染色 5分钟,加盖玻片,在酒精灯上过2-3次火,在盖玻片上复一层吸水纸,用手 轻轻下压,但勿使盖片移动,再用铅笔的胶皮头轻轻敲打几下,即可镜检,可以 观察减数分裂的各时期,以及精子的形成过程。

五.作业: 作业:
1.绘出你看到的前期分裂图,并写出这是什么时期的图像。 2.说明减数分裂的过程,它和有丝分裂有何不同? 3.减数分裂在生物进化中有什么意义?

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实验二

果蝇的饲养与形态观察

一.

实验目的: 实验目的:
1. 观察几种常见品系的果蝇,熟练掌握雌雄果蝇的鉴别。 2. 了解果蝇的生活史及饲养方法。

实验原理: 二. 实验原理:
1.果蝇的生活史: 果蝇属于昆虫纲、双翅目,与家蝇是不同的种。果蝇具有繁殖率高、饲 养简单、生活史短的特点,它的生活史包括卵 幼虫 蛹 成虫。 果蝇的生活周期长短与温度关系很密切,30℃以上的温度能使果蝇不育 和死亡,低温则使它生活周期延长,同时生活力也减低,果蝇培养的最适合 温度 20-25℃。
10℃ 卵 →幼虫 57 天 18 天 15℃ 20℃ 25℃

幼虫→成虫

8天 6.3 天

5天 4.2 天

2.果蝇的雌雄区别与观察:
果蝇有雌雄之分,幼虫期区别较难,成虫区别容易。雄性的腹部环纹5节,末端钝

而圆,颜色深。第一队脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏,称性梳。雌性腹 部环纹7节,末端尖,颜色浅,跗节前端无黑色鬃毛流苏。
雌雄 方法

观察项目

雌蝇

雄蝇

腹 肉 眼 鉴 别 部

较大

较小

腹 背 侧 解下 剖观 镜察 腹部 性梳

膨大呈椭圆形,尾 圆筒形,尾端较钝 端较尖 有黑色横纹 5-7 有黑色横纹 3-5 条,粗细均匀 条,末端一条特别 粗,尾端呈黑色 6 个腹片 无 4 个腹片
第一对跗节有性梳

3.果蝇的饲养: 果蝇在水果摊或果园常可见到,但它并不是以水果为生,而是食生长在水
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果上的酵母菌,因此实验室内凡能发酵的基质,均可作为果蝇的饲养物质。我 们实验室常用的是玉米粉饲养法。 300ml 体系中需加的成分: A: 糖 18.6g 琼脂 1.86g 水 108ml 。 B: 玉米粉 25.2g 酵母粉 2.10g 水 108ml。 A 和 B 混合加热成糊状后,加 1.5ml 丙酸,即可分装到培养瓶中。

三.实验材料及用品: 实验材料及用品:
1.材料:各种品系果蝇。 2. 用具:麻醉管,解剖镜等。 3. 药品:乙醚等。

四.实验方法: 实验方法:
把果蝇转入麻醉瓶中,塞上滴有乙醚的棉塞,待果蝇全部昏迷后,倒在解剖 镜的白瓷板上进行观察。对不需再培养的果蝇(如只进行性状观察的果蝇) ,可 以深度麻醉,致死也无妨(果蝇翅膀外展 45℃角,说明果蝇已死亡) 。 观察果蝇的形状特点,如:眼型、颜色、体色、翅形、性梳等形态特征。

五.作业: 作业:
1. 画出雌、雄果蝇腹部和背面简图。 2. 列表说明野生型与相应突变型异同。

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实验三

果蝇的单因子实验

实验目的: 一. 实验目的:
1. 理解分离定律的原理。 2. 掌握果蝇的杂交技术。 3. 记录交配结果和掌握统计处理方法。

二.实验原理: 实验原理:
一对基因在杂合状态中保持相对的独立性,而在配子形成时,又按原样 分离到不同的配子中去。理论上配子分离比是 1:1,子二代基因型分离比是 1:2:1,若显性完全,子二代表型分离比是 3:1。这就是分离定律。

三.实验材料及用品: 实验材料及用品:
1. 材料:长翅果蝇 +/+;残翅果蝇 2. 用具:麻醉管,解剖镜等。 3. 药品:乙醚等。 vg/vg。

四.实验方法: 实验方法:
1. 选野生型和残翅果蝇为亲本,做正交和反交组合。雌蝇一定要选处女蝇。 处女蝇在实验前 2—3 天陆续收集,数目多少根据需要而定。 2. 把长翅果蝇和残翅果蝇进行杂交,正交与反交各一管。即:长翅(♀)╳ 。 残翅(♂) ;长翅(♂)╳ 残翅(♀)(1)首先把长翅处女蝇倒出麻醉,挑 出 5—6 只移到杂交管中。 (2)其次把残翅果蝇倒出麻醉,在解剖镜下,仔 细挑出 5—6 只雄蝇,移到上述杂交瓶中。 (3)贴好标签:

(正交) P: +/+ ╳ vg/vg (♀) (♂) 月 日 姓名

杂交管放到 23℃温箱中培养。 反交与正交方法一样。 3. 7—8 天后,倒去亲本果蝇。 4. 再过 4—5 天,F1 成蝇出现,观察 F1 翅膀,连续检查 2—3 天。 5. 麻醉 F1 成蝇,移出 5—6 对果蝇,放到另一培养管内。这里雌蝇无须处女 蝇,在 23℃温箱中培养(反交同样做一管) 。 6.7—8 天后,移去 F1 亲本。 7.再过 4—5 天,F2 成蝇出现,开始观察。连续统计 7—8 天。被统计过的果
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蝇放到死蝇盛留器中。

五.实验结果: 实验结果:
填写下列表格
F1 观察结果 长翅♀х残翅♂ 统计日期 长翅数 残翅数 长翅数 残翅数 残翅♀х长翅♂





F2 观察结果 长翅♀х残翅♂ 统计日期 长翅数 残翅数 长翅数 残翅数 残翅♀х长翅♂





χ2 测验
长翅(+) (正交、反交合并) 实验观察数(O) 预期数 (3: (C) 1) 偏差(O-C) (O-C)2 C 残翅(vg) (正交、反交合并)





自由度=n-1= χ2=∑(O-C)2/C= 查χ2 表

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实验四

果蝇的二对因子的自由组合 果蝇的二对因子的自由组合

实验目的: 一. 实验目的:
1. 了解两对基因的杂交方法。 2. 记录交配结果和掌握统计处理方法。 3. 正确认识二对基因自由组合的原理。

实验原理: 二. 实验原理:
位于非同源染色体上的两对基因,它们所决定的两对相对性状在杂种第 二代是自由组合的。 因为根据孟德尔第二定律, 一对基因的分离与另一对 (或 另几对)基因的分离是独立的,所以一对基因所决定的性状在杂种第二代是 3:1 之比, 而两对不相互连锁的基因所决定的性状, 在杂种第二代就呈 9:3:3:1 之比。

实验材料及用品: 三. 实验材料及用品:
1. 材料:黑檀体突变型,ebony(e)位于第三染色体; 残翅突变型,vestigial(vg)位于第二染色体。 2. 用具:解剖镜,麻醉管,解剖针等。 3. 药品:乙醚等。

四.实验方法: 实验方法:
1. 收集雌果蝇品系的处女蝇。 2. 准备好培养基,把已麻醉的残翅♀、♂果蝇和黑檀体♀、♂果蝇,按正、 反交方式,分别放入不同培养管内,进行杂交,贴好标签,标签形式如 下:

vgvg++ × ++ee ♀ ♂ 日期 姓名

++ee × ♀ 日期 姓名

vgvg++ ♂

3.6—7 天后,见到有 F1 幼虫出现,可除去亲本(除干净! ) 4.再过 3—4 天,检查 F1 成蝇的性状,应该是灰体、长翅(正、反交相同) 。 若性状不符,表明实验有差错,不能再进行下去。发生差错的原因可能是 亲本雌果蝇不是处女蝇;F1 幼虫出现后亲本未倒干净;杂交时雄蝇选择 有误;以及亲本原种不纯等等。 5.按原来的正、反交各选 5—6 对 F1 成蝇(♀、♂) ,放到新的培养管,继 续饲养(此时不需要处女蝇) 。
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6.6—7 天后,除去 F1 代亲本。 7.再过 3—4 天,F2 代成蝇出现,麻醉后(可以深度麻醉)倒在白瓷板上, 进行统计,每隔两天统计一次,连续统计 6—7 天(当 F3 出现就失去意 义了) 。

实验结果: 五. 实验结果:
F2(正、反交合瓶统计)果蝇数目:
子代类型 长灰 统计日期 长黑 残灰 残黑


2



用χ 方法测验观察数与理论数符合程度(好适度) 。 2 χ 测验
长灰 实验观察数 (O) 理论数 (9:3:3: 1) (C) 偏差 (O-C) (O-C)2 C 长黑 残灰 残黑 合计

χ2[3]= ∑(O-C)2/C=? 自由度=4-1=3 若 P>0.05,说明实验符合二对因子自由组合的假说。 若 P<0.05,说明这个实验数据不能用二对因子的自由组合来解释,也就否定 了原来的假设,即不能认为是自由组合。

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实验五

果蝇的三点试验

实验目的: 一. 实验目的:
1. 了解绘制遗传学图的原理和方法。 2. 学习实验结果的数据处理。

实验原理: 二. 实验原理:
基因图距是通过重组值的测定而得到的。如果基因座位相距很近,重组 率与交换率的值相等,可以根据重组率的大小作为有关基因间的相对距离, 把基因顺序地排列在染色体上,绘制出基因图。可是如果基因间相距较远, 二个基因间往往发生二次以上的交换,这时如简单地把重组率看作交换率, 那么交换率就要低估了,图距自然也随之缩小了。这时需要利用实验数据进 行校正,以便正确估计图距。根据这个道理,可以确定一系列基因在染色体 上的相对位置。例如 a、b、c 三个基因是连锁的,要测定三个基因的相对位 置可以用野生型果蝇(+++,表示三个野生型基因)与三隐性果蝇(a、b、c 三个突变隐性基因)杂交,制成三因子杂种 abc/+++,再把雌性杂种与三隐 性个体测交,由于基因间的交换,从而在下代中得到 8 种不同表型的果蝇, 这样经过数据处理,一次实验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序,这种 方法,叫做三点测交或三点实验。

三. 实验材料及用品: 实验材料及用品:
1. 材料:黑腹果蝇品系:野生型果蝇(+ + +)长翅、直刚毛、红眼; 三隐性果蝇(m sn3 w)小翅、焦刚毛、白眼。 2. 用具:解剖镜、麻醉管等。 3. 药品:乙醚等。 实验方法: 四. 实验方法: 1. 收集三隐性个体的处女蝇,培养在培养管中,每管 5—6 只。 2. 杂交: 挑出野生型雄蝇放到处女蝇管中去杂交, 每管 5—6 只。 贴好标签, 在 25℃中培养。 3. 7—8 天后,出现蛹。倒出亲本。 4. 再 4—5 天后,蛹孵化出子一代(F1)成蝇,可以观察到 F1 雌蝇全部是 野生型表型,雄蝇是三隐性。 5. 从 F1 代中选 20—30 对果蝇, 放到新的培养管中继续杂交。 每管 5—6 对。 6. 7—8 天后,蛹出现,倒去亲本。 7. 再 4—5 天后,蛹孵化出子二代(F2)成蝇,开始观察。 8. 把 F2 果蝇倒出麻醉,放在白瓷板上,用实体显微镜检查眼色、翅形、刚 毛。各类果蝇分别记数。检查过的果蝇倒掉。过两天后再检查第二批, 连续检查 8—10 天,即 3—4 次。在 25℃下,自第一批果蝇孵化出 10 天 内是可靠的,再迟时 F3 代就可能出现了,要求至少统计 250 只果蝇。

五. 实验结果: 实验结果:

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按下列顺序填表和计算(所列数字系举例说明) 。 1. 先写出所得到的 F2 代八种表型,填上观察数,计算总数。
三点测交实验中观察的记录实例 重组发生在 测交后代表型
3

观察数 372 285 95 97 4 4 91 52 1000 组 值

m- sn3 + + + + 151 15.1%

m-w + + + + 335 33.5%

w- sn3 + + + + 200 20.0%

Sn W m + + + + W + 3 sn + m 3 sn + + + W m + + m 3 sn W + 总 计 重

2. 填写“基因是否重组一栏” 。因为测交亲本是三隐性,所以若基因间有交 换,便可在表型上显示出来。因而从测交后代的表型便可推知某二个基 因是否重组。 3. 计算基因间的重组值: m—sn3 间的重组值=151/1000×100%=15.1% m—w 间的重组值=335/1000×100%=33.5% w—sn3 间的重组值=200/1000×100%=20.0% 4. 画遗传学图: m 15.1 sn3 20.0 w 33.5 m—w 间重组值小于 m—sn3 间和 sn3—w 间重组值之和, 这是什么原因? 5. 计算双交换值: m—w 间重组值小于 m—sn3 与 w—sn3 间重组值之和,这是因为两个 相距较远的基因发生了双交换的结果。而这种发生了双交换的果蝇在基因 顺序尚未揭晓时,也就是说,当遗传学图还没有画出时,是难以确定的。 遗传学图画出以后,可以分析出 m—w 间发生双交换能产生两种表型的果 蝇。m+W(小翅、直刚毛、白眼)和+sn3 +(长翅、卷刚毛、红眼)。这两种 果蝇计有八只,在计算 m—W 间重阻值时,这个值没有被计算进去。二个 相距较远的基因的重组值被低估了。低估的值是 8/1000×100%=0.8% 因为是双交换,所以再乘以 2,得 0.8%×2=1.6%。这就是校正值。画 出图距。 m 15.1 sn3 20.0 w 33.5+1.6=35.1
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6. 计算并发率和干涉: 如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换,那么预 期的双交换频率应等于两个单交换频率的乘积。但实际上观察到的双交 换频率往往低于预期值。因为每发生一次单交换,它邻近也发生一次交 换的机会就减少一些,这叫做干涉。一般用并发率来表示干涉的大小。 并发率=观察到的双交换频率/两个单交换频率的乘积 干 涉=1-并发率 在上例中: 并发率=0.8%/15.1%×20.0%=0.26 干 涉=1-0.26=0.0.74

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实验六

果蝇的伴性遗传

实验目的: 一. 实验目的:
1. 2. 记录交配结果和掌握统计处理方法。 正确认识伴性遗传的正、反交的差别。

实验原理: 二. 实验原理:
位于性染色体上的基因,其传递方式与位于常染色体上的基因不同,它 的传递方式与雌雄性别有关,因此称为伴性遗传(sex-linked inheritance) 。 果蝇的性染色体有 X 和 Y 两种, 雌蝇为 XX, 是同配性别; 雄蝇为 XY, 是异配性别。 1. 交配方式: A: ♀[+/+] ×[W] ♂ B: ♀[W/W] ×[+] ♂ P: [+/+]♀♀×[W] ♂♂ [W/W]♀♀×[+] ♂♂ [+/W]♀♀×[W] ♂♂ F1: [+/+;+/W]♀♀×[+] ♂♂ F2: ♀[+/+] ♀[+/W] ♀[+/W] ♀[W/W] ♂[+] ♂[W] ♂[+] ♂[W] 若 A 为正交,F1 代♀、♂都为野生型[+],F1 相互交配得 F2 代,则♀都 是野生型[+],♂性则野生型[+]和白眼[W]各占一半,比例为 1:1。 B 是 A 的反交,F1 代与 A 不同,♀为野生型[+],而♂为白眼[W],此现 象又称为绞花式遗传(lriss-cross inheritance) 1 相互交配得 F2 代, 。F ♀的红眼与白眼比例为 1:1,♂的红眼与白眼比例也是 1:1。 2. 注意: 1) 常染色体性状遗传的正、反交所得子代♀、♂性状相同,而伴性遗 传则不同。 2) 在进行伴性遗传实验时,也有例外个体产生,这是由于两条 X 不分 离造成的(B 杂交组合) 1 中出现了不应该出现的♀性白眼,但这 ,F 种情况极为罕见,约几千个个体中有一个。

实验材料及用品: 三. 实验材料及用品:
1. 材料: 黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster) 品系; 野生型 (红眼) wild type ,

(+)突变型(白眼) ,white eye(w) ,此基因在 X 染色体上。 2.用具:解剖镜,麻醉管,解剖针等。 3.药品:乙醚等。

实验方法: 四. 实验方法:
1.收集处女蝇:由于雌蝇生殖器官中有贮精囊,一次交配可保留大量精子, 供多次排卵受精用,因此做杂交实验前必须收集未交配过的处女蝇。由于 孵化出的幼蝇在 12 小时内(更可靠是 8 小时)不交配,因此必须在这段 时间内把雌、雄蝇分开培养,所得的雌蝇即为处女蝇。 2.准备好培养基,按正、反交组合,把已麻醉的红眼♀、白眼♂和红眼♂、
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白眼♀分别放入不同管内进行杂交,贴上标签。标签形式如下:
B 组合 ww х +Y 日期 姓名

A 组合 ++ х wY 日期 姓名

3.6—7 天后,见到有 F1 幼虫出现,即除去亲本果蝇(一定要除干净!。 ) 4.再过 3—4 天,观察 F1 成蝇的性状。 (正、反交有什么不同?眼色和性别的 关系如何? 5.所出现的 F1 雌、雄果蝇麻醉后,挑 3—5 对果蝇换入新的培养基继续饲养 (此处无需处女蝇,为什么?) 。两组合后代不能混合,应分别培养。 6.6—7 天后又需除干净 F1 代亲本果蝇。 7.再过 3—4 天,F2 代成蝇出现,麻醉后倒在白瓷板上观察眼色和性别,进 行统计。 8.每隔 1—2 天统计一次,累积 6—7 天数据。
五.实验结果统计 实验结果统计:

A 组合: (正交)♀++хwY♂
F1 观察结果 各 统计日期 红眼♀[+] 红眼♂[+] 类 果 蝇 的 数 目

B 组合: (反交)♀wwх+Y♂
F1 观察结果 各 统计日期 红眼♀[+] 白眼♂[w] 类 果 蝇 的 数 目

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A 组合:
F2 观察结果 各 统计日期 ♂红眼[+] ♂白眼[w] ♀红眼[+] ♀白眼[w] 类 果 蝇 的 数 目

合 百

计 分 比

B 组合:
F2 观察结果 各 统计日期 ♂红眼[+] ♂白眼[w] ♀红眼[+] ♀白眼[+] 类 果 蝇 的 数 目

合 百
2

计 分 比

χ 测验: X2=Σ(观察值-理论值)2/理论值 2 2 根据 X 测定,查 X 表,若 P>5%,说明观察值与理论值之间的偏差是没有 意义的,也就是说,可以认为观察值是符合假设的。具体对这个实验来说, 所得到的实验结果应该是符合伴性遗传的假说,也就是说眼色的这对性状是 由于性染色体 X 上的一对等位基因控制的。

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实验七

果蝇唾腺染色体

一. 二.

实验目的: 实验目的:练习取出果蝇幼虫唾腺组织,制作唾腺组织染色体标本。 实验原理: 实验原理:双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大,其

中的染色体称为唾腺染色体(salivary chromosome) 。这种染色体比普通染色 体大得多,宽约 5μm,长约 400μm,相当于普通染色体的 100-200 倍, 因而又称为巨大染色体。唾腺染色体经过多次复制而并不分开,大约有 1000 -4000 根染色体丝的拷贝,所以又称多线染色体(polytene chromosome) 。 多线染色体经染色后,出现深浅不同、密疏各别的横纹,这些横纹的数目和 位置往往是恒定的, 代表着果蝇等昆虫的种的特性。 如染色体有缺失、 重复、 倒位、易位等,很容易在唾腺染色体上认别出来。

实验用品: 三. 实验用品:
1. 材料:果蝇的三龄幼虫。 2. 用品:解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 3. 药品:改良苯酚品红等。

实验方法: 四. 实验方法:
1. 把载玻片置于解剖镜下。载玻片上滴水一滴,取三龄幼虫放在其中,操 作者两手各握一枚解剖针,左手的解剖针压住幼虫后端1/3处,固定幼 虫。右手解剖针按住幼虫头部,用力向右拉,把头部从身体拉开,唾腺 随之而出,唾腺是一对透明的棒状腺体(如图) 。

2. 在载玻片上除去幼虫其他组织部分,还要把唾腺周围的白色脂肪剥离干 净,再滴上改良苯酚品红染色。 3. 固定染色 5-10 分钟后,盖上干净的盖玻片,用吸水纸覆盖上,然后放 在平的桌子上,用大拇指用力压下住。 4. 制成标本进行观擦。 五.

作业:绘制果蝇唾腺染色体图。 作业:

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实验八

X -染色质的观察

一.实验目的: 实验目的:
掌握鉴别 X-染色质的简易方法,识别其形态特征及所在部位。

二.实验原理: 实验原理:
1.概念:人们已知的基因确实有不可逆转的失活或丢失,受永久失活所调节 的例子涉及到一个完整的染色体,即 X-染色质,失活的染色质叫巴氏小 体。 在雌性哺乳动物中,包括人类,女性口腔粘膜细胞中约 30%-50%(男 性 0-2%)的细胞中,XX 染色体其中一条就是失活的(但在性细胞中这个 染色体则不失活,如果也是失活的,那大家可以想象会发生什么样严重后 果),表现为浓固缩状态。 2.发生的时期:这种现象发生在胚胎早期,染色体失活是随机的,某些细胞 中是父性 X-染色体失活,而有些细胞则是母性 X-染色体失活,这些细 胞能产生同期相同 X-染色体失活的细胞,这样一个正常女性就是具有两 种 X-染色体组织类型的嵌合体。巴氏小体在细胞周期中比有活性的 X- 染色体复制要晚。 3.形态表现:X-染色质的形态表现为,结构致密浓染小体,轮廓清楚,常 附着于核膜边缘或靠近内侧,其形状有:微凸形、三角形、卵形、短棒形 及双球形等。 4.发现:Mary F.Lyon 第一个发现巴氏小体是失活的 X-染色质,所以在雌 性哺乳动物中,一个 X-染色体随机失活的想法叫 Lyon 假说。雌性哺乳动 物的这种失活似乎是一种获得剂量补偿的方法,因为她们有两倍于雄性哺 乳动物的 X 连锁等位基因,但现在还不清楚 X-染色质是怎样失活的。 在某些时期的嵌合体细胞中,失活 X-染色质的数量始终比总的 X- 染色体数要少.如一个特纳氏(Turner XO)综合症的雌性人没有失活的 X -染色体。一个克兰费尔特氏(Klinefelter XXY)综合症的雄性人每个 细胞有一个失活的 X-染色体,而一个(XXX)的雌性人每个细胞中有两个 失活的 X-染色质。因此用这一方法可检测出一些遗传疾病。

三. 实验用品: 实验用品:
1.材料:女性口腔颊部粘膜细胞。 2.用品:显微镜,载玻片,盖玻片,吸水纸等。 3.药品:吉姆萨染液等。

实验方法: 四. 实验方法:
1.女性口腔颊部粘膜细胞的观察:从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细 胞,在原位刮取 2~3 次,可涂 1~3 片,干燥后,用 Gimsa 染色液染 10 分钟,勿使干燥,用水冲洗后晾干镜检。 2.毛发根部细胞的观察:拔取一根带有毛根的毛发,自基部截取 2cm 左右 置载玻片上,在毛根部加一滴地衣红染液,片刻后再加一滴 50%醋酸(或只
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加 50%醋酸) ,低倍镜下观察,待毛根鞘软化后,拔去毛干,重新加一滴染 液,加盖片,在酒精灯上轻微加热后,静置 5 分钟,加吸水纸,用手指轻压 后镜检。 3.X-染色质的辨认:低倍镜下检出典型的可数细胞,其标准是: ⑴核质是网状或细颗粒状分布。 ⑵核膜清晰,核无缺损。 ⑶染色适度。 ⑷周围无杂菌。 选定后的细胞,在高倍镜或油镜下进一步观察。X-染色质的形态表现 为一结构致密浓染小体,轮廓清楚,常附着于核膜边缘或靠近内侧。

五.作业: 作业:
1.分别观察 50 个男、女性可数的细胞并计算各自的巴氏小体细胞所占的 百分比。 2.在观察中画出 4~5 个典型细胞,标明巴氏小体的部位。

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实验九

骨髓细胞染色体的制备与观察

一. 实验目的: 实验目的:
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制备方法,计算骨髓细胞分裂中 期的分裂相的染色体数目并观察端着丝点的形态特点.

二. 实验原理: 实验原理:
骨髓细胞是分裂较旺盛的体细胞,可得到较多的细胞中期的分裂相.

三. 实验用品: 实验用品:
1. 材料:小白鼠(2n=42) . 2. 用品:显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅、离心机、注射器、解剖剪、 镊子、移液器、载玻片、烧杯等。 3. 药品: 0.1%(W/V)秋水仙素、 2%(W/V)柠檬酸钠溶液、 0.07M 氯化钾溶液、 (或 0.35%氯化钾溶液) 、蒸馏水、Giemsa 原液,甲醇、乙酸等。

四. 实验方法: 实验方法 方法:
1. 取材及前处理:取健康小白鼠(约 65-90 天龄) ,腹腔注射 0.1%秋水仙素 溶液 0.1ml,剂量为 4ml/Kg 动物体重。 2. 取骨髓:将已用秋水仙素前处理的小白鼠,经过 2-3 小时后,用损伤脊椎 法处死小白鼠,立即取出两侧股骨,把肌肉刮净,然后从骨股两端关节 处剪下,用 2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌肉残渣,剪去骨股两 端膨大的关节头,使其露出骨髓,然后用吸有 3-5ml2%柠檬酸钠溶液的 注射器,从股骨的一端插入针头,往骨髓内冲洗多次,直至股骨断面变 成粉白色为止,可多剪几个断面反复冲洗,这样制备了骨髓细胞悬浮液, 也可用眼科镊子小心地取出骨髓,置于有少量柠檬酸钠溶液培养皿中捣 碎,然后再加入 2%柠檬酸钠溶液适量,制成 3-5ml 骨髓细胞悬液。 3. 低渗处理:用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管内,1000rpm 离心 10 分钟,吸去上清液。加入 0.075M 氯化钾溶液 5ml 立即将细胞团吹打 均匀,置 37℃水浴 25-30 分钟。 4. 预固定、固定:经低渗处理后的细胞,加入卡诺氏固定液 5-6 滴搅拌均匀 进行预固定 10 分钟,然后以 1000rpm 离心 10 分钟,此为第一次固定然 后以同法离心,弃上清液,仅留约 0.2-0.3ml 的细胞团与部分上清液,吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好,可再按上述方法 再固定 1-2 次,使染色体进一步分散。 5. 气干法制片:取预先冰冻的载玻片,滴 2-3 滴细胞悬浮液于其上,立即吹 气均匀打散、过火、置室温中自然干燥。 6. 染色:用 Giemsa 染液,染色 15-20 分钟,自来水冲洗,空气干燥。 7. 镜检:在低倍镜下观察中期分裂相细胞,选取一定数量的细胞(通常选 100 个细胞) ,染色体分散好的中期分裂相,分别计算染色体的数目,以 确定其细胞 2n 的染色体数目。
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油镜观察分散好、不重叠,染色体收缩适度、较平直的分裂相,注 意小白鼠是端着丝点染色体的特征。认别着丝点、染色体、染色单体。

五.作业:绘制一个图像清晰、形态典型的小白鼠染色体组形图。 作业: 作业

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