当前位置:首页 >> 生物学 >>

融合PCR


融合PCR

(一)融合PCR的定义
(The definition of fusion PCR)

融合PCR技术( fusion PCR)采用具有互补末端的引物, 形 成具有重叠链的PCR产物, 通过PCR产物重叠链的延伸, 从 而将不同来源的任意DNA 片段连接起来, 此技术在不需要 内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的体外 连接, 为同源重组片段的构建提供了快速简捷的途径。

(二)融合PCR的原理
(The experiment principles )

P2、P4为具有末端互补的引物 P1、P4为两端引物

①引物设计 ②对连接片段进行扩增并回收
③将连接片段混合进行PCR扩增 ④验证

图(a)1:Marker、2~4:未融合片段、5:融合后片段 图(b)1:Marker、2~5:未融合片段、6:融合后片段

(三)融合PCR的其他应用
(The other application of fusion PCR) 目标片段的缺失

在片段的左右两端设计末端互补的引物

进行融合

基因片段的缺失

总结

融合PCR是一种高效体外连接目的片段和定点缺失目的基因的有效方法之一。

参考文献:

[1]李敏,杨谦.一种高效构建同源重组DNA片段的方法融合PCR[J]中国生 物工程杂志. 2007, 27( 8): 53~ 58.

引物设计原则 1、长度:15—30BP,其有效长度[LN=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度 会超过TAQ酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。 2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般是较低TM值引物的TM值减去5— 10度。引物长度小于20时,其TM恒等于4×(G十C)十2×(A十T)。 3、碱基分布的随机性:应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连 续G或C,否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。 4、引物自身:不能含有自身互补序列,否则会形成发夹样二级结构。 5、引物之间:两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3’ 端的互补重叠。 6、上下游引物的互补性:一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。 7、3’末端:如果可能的话,每个引物的3‘末端碱基应为G或C。 8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。


相关文章:
2016年西综模拟试题四
PCR 基本步骤包括变形、退火、延伸 C、反转录 PCR 技术、原位 PCR 技术、异位...双手 X 线提 示骨质疏松,双腕关节各骨融合,双手掌指关节和近端指间关节间隙...
体细胞克隆技术的原理及过程
相似, 分子量约为 75 kD(图 3),PCR 检测结果证明均成功整合外源基因(图 4...2.2 克隆胚的发育情况 如表 1 所示, 共融合 156 枚重构胚, 融合率为 64...
博士硕士研究生入学考试-细胞生物学-简答论述及参考答案
以下图为例, 将 GST 的基因与蛋白 X 的基因融合,表达出融合蛋白。将该融合...16.什么是 RT-PCR,影响 RT-PCR 效率的因素 逆转录 PCR(reverse transcription...
PCR-ELISA端粒酶检测法
PCR-ELISA 端粒酶检测法 发布日期:2007-6-27 热门指数:782 收藏 端粒是真核生物...防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色 体移位和染色体缺失)中起...
高二生物题中测试
脱氧核糖与脱氧核糖 ) 利用 PCR 技术扩增目的基因需要的条件是 ( ②DNA 引物;...(2) 过程③在化学药剂___的作用下会发生细胞融合; (3) 过程___ __属于脱...
中国医科大学2015年9月考试《医学遗传学》考试答案
PCR 后酶切和原位杂交 正确答案:B 16. 磷酸钙沉淀法转移外源目的基因的正确说法是() A. 增强细胞膜的通透性 B. 通过细胞膜融合 C. 通过细胞内吞作用 D. ...
水滴系列高中生物第十一单元现代生物科技专题第37讲基...
回答下列问题: 3 (1)酶 D 基因和转运肽基因所含的三种限制酶(ClaI、 SacI、 XbaI)的切点如图甲所示,现为获 得融合基因,研究人员采用 PCR 法扩增酶 D 基因...
达安HBV-DNA定量试剂说明书
几乎所有慢性骨髓性白血病患者都可检测到原癌基因易位导致的 BCR/ABL 融合基因形成,定量 PCR 技术可 通过检测 BCR/ABL 融合基因的表达确定微量残余恶性细胞存在的...
基因工程和细胞工程测试题(附答案,可用于考试)
融合本身与生物膜的流动性直接相关 18.下列不属于动物细胞工程应用的是( ) A....若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒,你认为可以用 PCR 扩增血液中的( ) A....
质谱分析蛋白质的相互作用
该系统是通过两个分别称之为“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”的融合蛋白形成一个完整...(16~24 h),经过蓝白斑筛选后,对阳性克隆菌落提取质 粒并进一步PCR和酶切...
更多相关标签: