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小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC


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安 徽 医 药

A nhuiM edical and Pharmaceutical J ournal

2007 Sep ; 11 ( 9)

小专论

小议在 M TT 法测细胞增殖抑制率中 IC50 的计算方法
赵 斌 , 葛金芳 , 朱娟娟 , 黄晓晖 , 李
1 1 2 1



1

( 安徽医科大学 1. 药学院 ; 2 . 基础医学院生物教研室 , 安 徽 合肥 摘要 : 半数抑制浓度、 半数致死 量等半数量是分析和比较药效 及毒效的重要数值 , 可用 以测定 药物安 全性、 比较效 价等 , 其 具体应用范围广泛 , 但计 算相同。 本文阐 述了半数 抑制 浓度 ( IC50 ) 的概念 、 含义、 计 算原 理以及 几种 具有实 际应 用价 值、 精密度较好的计 算方法。 重点讨 论在 M TT 法测药 物对 细胞 增殖抑制的影响中计算 IC50的特点和注 意事项等 , 对正确、 简 便求解 IC50值进行了初步探讨。 关键词 : 半数抑制浓度 ; IC50; MTT 半数抑制浓 度 ( 50 % concentra tion of inh ibition , I C 50 ) 、 半 数致死量 ( M edian L etha l D osage , LD50 ) 、 半数 致 死接 触时 间、 半数有效量等反映药效或毒效 的半数定量指标都建立在质反 应 ( 如动物的存亡、 有效与否等定性反应 ) 的量 效关系基础上 的数据 , 其性质、 特点、 统计计算和数学规律均基本相同。 1 IC50 的概念及含义 半数抑制浓度 ( IC50 )
[ 1]

230032)

将横坐标 的剂量改为 对数剂量 , 则曲线 就化成为 对称 的常态曲线 ; 剂量对数值与死亡率间为 S 型曲线 , 向心对称 , 对称中 心纵坐标为 50 % 死亡 率 , 横 坐标 为 Log IC50。该 曲线 的两 端 平坦 , 中 间 陡斜 , 曲线 中 段死 亡 率 在 50% 附近 的 点 比 5 %、 95% 的点更为重要 ; 剂量对数值与概率单位之间为直线 关系。为 了便于数 学回归分析 , 需要将 S 型 曲线 转化为 直线 , 引入 机率 单位 ( P rob it) 的概念 , 通过查表可将死 亡率转化为 机率单位 。 所有不同的 LD50 计 算方 法都 是基 于这 些质 反应 的特 点 设计和推导的。通过以 上的分 析 , 我 们可以 知道药 物浓度 和 抑制率 并不呈明 确的直线相 关 , 而 是药物抑制 率的机率 单位 同药物浓度的对数值呈直线关系。有人通过仅仅以 药物浓度 为横坐标 , 以 抑制率 为纵坐 标 , 作 X、 Y 的散点图 , 直 线拟合 , 求得直线回归方程来计算 IC50, 我 们认为这种方法 不够严谨 , 理论依据不足 , 不完全符合计算原理 , 计算结果不可信。 并且 在实际应用中 , 往 往很 难作 出一 条满 意的 直线 , 相 关 系数 太 小 , 故不推荐采用。 3 IC50 的计算方法及适 用条件 计算 IC50 的方法多达几十余种 [ 4] , 包括正规机 率单位法、 点斜法、 顾 汉 颐氏 公式 法、 图 解 法、 寇氏 法、 序 贯 法、 L og it 法 等 , 近年来 , 又出现 了上下 移位法 ( up-and-down 法 ) [ 5] 、 固定 剂量法 ( F ixed do se precedure) [ 6] 、 评 估法等 [ 7, 8] , 本 文主要 介 绍几种精密度较好 , 有实际应用价值的方法。其他方法虽多 , 但无特殊优点。 3 . 1 正规机 率单位法 B1 iss 所 创建 , 后为 F isher 等所发 展 的加权机率单位法 , 在数理上最为严谨精密 , 故称为 机率单位 正规法。其它许多方法 虽然也 称为机 率单位法 , 但 有的未 计 算权重。它有以下特点 : 作图估线、 加权回归、 作业校正、 逐次 逼近、 全面检验。正规法可以算出 I C 50 、I C 10 等及其标准误、 可 信区间等全面 有关 数据 , 而 且可 进行 各种 误差 及精 度 检验。 适用于任何实验设计 , 对符合常态分布原则的实验 , 本法可作 为标准方法。但其计算复杂 , 现在多采用统计软件求解 , 具体 方法如下。 3 . 1. 1 SPSS 软件在 IC50计算中的应用 [ 9] 进入 SPSS 数据编 辑器 后 , 激 活 变 量 表 ( V ar iable v ie w ) 定 义 变 量, 在 变 量 名 ( na m e) 下, 输入 剂 量 、 抑制 率 、 总值 , 然后进 入数 据表 ( D ata v ie w ), 根据表头提示 , 依次输入各组数据。选择参数 A na ly sis regression prob it , 调出 Prob it ana lys is 对话框 , 将 剂 量 选入 Covariates 栏中 , 抑制率 选入 Response frequency 栏中 , 总值 选入 T ota l observed 栏中 , 总值 多设为 100% , 在 T ransfor m 栏中, 选 择 L og base 10 , 在 M ode l 栏 中选 择 Probit 概 率单 位模 型 , 在 O ptions 栏中 选 择 calcu late fro m data 即依据现有数量所得的在缺少刺激条件下的响 应率来估 计自然响应率 , 其他保持默认选项 , 然后单击 OK 即可。

是指在用药后存活的细胞 数量减

少一半时所需的药物 浓度。在 M TT 法中 , 就 是以对照 组吸光 度 OD 值减少一半 所需 的药 物浓 度为 I C 50 。除此 以外 , 半 数 抑制浓度的含义还相当于药物 对培养细胞的最小致死剂量的 平均值 , 作为反映药效的定量指标 , 在各种药物的筛选中广泛 应用。该结论可由 1926 年 W ijngaarden 在 573 头 家猫身 上进 行了洋地黄制剂的最 小致死量实验中得出。 M TT 法检测 药物影 响细 胞增 殖的 原理 是只 有存 活的 细 胞 能 使 外 源 性 的 M TT 还 原 为 难 溶 的 蓝 色 结 晶 物 甲 瓉 ( for m azan) 并沉积在细胞中 , 在二甲 亚砜中 溶解显 色 , 而 死细 胞不能利用 M TT 故不能显 色 。对每 个细 胞而言 只有 死亡 与存活、 显色与不显 色两 种情 况 , 与 LD50 计 算中 要求 的质 反 应一致 , 并且符合常 态分 布 , 故 可以 应用 计算 LD50 的 方法 来 求解 IC50, 同样半数抑制浓 度相当 于药 物对 细胞的 最小 致死 量的均值。而 IC50、 LD50 的 测定比 测定 最小 致死 量要 方便 得 多 , 其稳定性和准确性都比 较好。所以 , I C 50 已成 为标志 药物 效应的一种重要定量 指标。 2 IC50 的计算原理 为便于求 解 , 这 类质反应通 过多次转变 才可变为 直线相 关。具体如下 [ 3] : 致死剂量的对数值与动 物死亡率之间为常态累积曲线 关系。每个动物的致 死量与动 物的个 体差异 有关 , 多数 动物 处于中等敏感的范 围内。如果 以致死 量为横 坐标 , 以动 物死 亡率为纵坐标 , 则可绘成一个钟形曲线 , 这一曲线与常态曲线 不完全相同 , 其剂量大的一侧拖出长尾现象 ;
基金项目 : 安徽医科大学校科研基金 (编号 : 2005K J31 ) 安徽医科大学校科研基金追加项目 ( 编号 : 2007K JZJ02 ) 通讯作者 : 李 俊 , 男 , 博士 , 教授 , 博士 生导 师 , E-m ai: l l ijun@ ahm u . edu . cn
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完成上述操作 , SPSS 会自动显示全部 分析结果 ( Spss v ie w er), 首先显示共有几组数据进行 了概率单位模型分析 , 回归 方程经过几次叠代运算后确定 , 该方程拟 合优度检 验 2 值、 P 值 ( P > 0. 05), 说明曲线拟合良好。接 着 , 系统 显示剂量 对数 值 ( X )、 个 体总数 ( N umber of Subjects) 、 观 察到的反应 数 ( O bserv ed R esponses) 、 预 期 反应 数 ( Expec ted R esponses) 、 残差 ( R es idual) 和效应的概 率 ( P rob) 之 后 , 显示各 效应概 率水 平的 剂量值 ( 包括 0 . 50, 即 IC50 ) 及 其 95% 可 信区间 值 , 以及 对数 单位与概率单位的关 系曲线图。 3. 1 . 2 SAS 软件在 IC50计 算中的 应用 目前 世界公 认的 专业统计软件 , 其统计程序、 统计函数和 各种算法科学、 严 谨、 精确 , 适用于不同领域的统计 计算。运用 SA S 软 件进行 生物 检定中 LD50 的计算 , 直接 利用原 始试 验数 据 , 调用 SA S 内 部 函数 LD50 . sas , 或编制专门的 程序 [ 11 ] , 其算 法科学 合理 , 简便 快速 , 结果精确可靠 , 具体见参 考文献。 3. 1 . 3 其他 应用 F oxpro2. 5 中的 LD50计算函数 [ 12] , 还可在
[ 13] [ 10 ]

定药物 作用的强 弱和特异性 , 为药 物筛选和临 床研究提 供依 据。和 LD50计算不同的 , M TT 法中 IC50计算有其自身特点 : 体外实 验和体内实 验影响因 素不同 ; 由整体 动物模型 变为 细胞水平 , 更为精细 ; 样本数 量变化 大 , 每 孔中的 细胞数 量 可达到 104 ~ 105个 , 远大于每组动物数 ; 细胞数量通过 显色 反应由测得的 OD 值表示 , 并且由 OD 值来计算药物对细胞的 抑制率。这是因为细胞数量和 O D 值大小在很大 的范围 ( 200 ~ 5 105 个 ) 成 确定的直线回归关 系 , 可用 OD 值代表细 胞数 量 , 以 OD 值来计算药物对细胞增殖的抑制率 [ 14] 。 4 . 2 注意事项 4 . 2. 1 结果判断 在实验结果中 , 可能会出现一些数据 比较 混乱 , 参差不齐 , 或是小 剂量组 抑制率 反而高于 大剂量 组 , 或 是各点 连线呈现 曲线关系 , 造成这 种情况可能 有以下几 方面 的原因 : 加药前每孔中接种的细胞数量相差较大 , 人为影响 对抑制率的计算。解决的办法我们认为在给每组接 种细胞的 同时 , 接种一孔作为对照 , 比较各组对 照孔的 OD 值应无 显著 性差异 ; 并且在横向分组时接种细胞的顺序应为纵向 , 以减少 组间的细胞数差异 ; 可采用异质性检验 , 如异质性 有显著意 义。往往意味着实验数据不符合常态分布原理 , 应追查原因 , 重做实验。异质性数据 可校 正后 计算 IC50 值 , 此时 可信限 范 围格有所扩大 ; 若出现多组数据混乱 , 可在实验的 同时做一 条细胞 数量的标 准曲线验证 , 即细 胞计数后倍 比稀释接 种培 养板 , 温育后不加药物 , 直接 通过 M TT 法 测吸光 度 , 绘制 OD 值对细胞数量的回归线 , 正常应为直线关系 , 否则可 能实验有 错误 , 需重新实验 ; 药物对细胞的抑制作用有可能 不成常态 分布 , 已发现 并经遗传 药理学研究 证明了某些 药物的致 死量 并不符合常态曲线 , 如阿托品对家兔、 异烟肼对大白 鼠等。 4 . 2 . 2 其他 多种药物筛选比 较时 , 可 通过各药 的 I C 50 假 设检验 [ 4] , 明确药物作用效应 的大小 , 比较两药 IC50之间 的差 别有 无显 著意 义 , 可用 两组 t 检验 , 但 计算 中不 能直 接计 算 I C 50 的差值 , 而应计 算 Log IC50; 为了 更全 面地 反映 药物 作 用特征最好列出 IC50及 95% 平均可信区间 ( L95 ), 并 用括号附 以 b 值或 I C 10 值 ; 实验时抑制率应超过 50% , 保证量 效曲 线跨越足够的范围 , 不可外推计算 I C 50 ;
- 9 - 1

Ex cell中调用 VB 编辑器 编写程 序 , 以 B1iss 算 法为原 理 , 利用现代高科技计算 机技术求解 IC50的值 , 具体见参考文献。 3. 2 点斜法 又名综合 法、 改 良寇氏 法 , 是 我国孙 瑞元 教授 提出 的较实用 的计算法 , 可以简 捷地算得与 正规法相 当接近 的全部 IC50有关数据。其精确度优于其 它各种简化 法。该法 适用于 : 剂量呈等比数 列 ; 各组动 物或细 胞数基 本相 等 , 死亡率、 抑制率 分布 大致 符合 常态。 采用 Pm 11, P n 0 时的校正法 , 死亡率 ( p) 无论 是否 包括 0 % 或 100% , 均可 计 算 , 这一点优于寇氏法。 基本公式 : I C50: I C50 = Log- 1 [ Xm- i ( p- 0 . 5) + i/4 ( 1- P m - Pn) ] 含 0% 及 100 % 死亡率时的 LD50 : IC50 = L og- 1 [ Xm - i ( p- 0. 5) ] 式中 X m 为最高死亡率 P m 组的 剂量对数值 , i为组 距 , Pm 为最高死亡率 , Pn 为最低死亡率 , n 为各组组内动物数。 3. 3 图解法 L itchfie ld 等提出 , 设计 机率单位 对数坐标纸 及一系列诺模图 , 使直接图解法可以算出 I C50各有关数据。优 点有 : 简便、 灵活 , 剂量间不一定 要求有等距 或等比关系、 有权 重含意。但目测图解法在精密度上则受到一些损失 , 特别是有 些实验数据由不同人来计算 , 可能得到不同的 IC50值。 3. 4 IC 50 参数的显著性检验 3. 4 . 1 拟合度检验 检验 预期回 归线与 计算的回 归线 是否 拟合 , B liss法中 Y - yr的差值 不应超过 0. 2, 否则要进 行再一 轮计算 , 如差值均小 于 0. 2, 则可 以为 预期拟 合 合格 , 可以 计 算 IC50 及其有关 数据。 SPSS 软件 中采用 拟合优 度检验 2 值 表示 , 并且求其 P 值 ( P > 0. 05), 以 判断 是否拟 合良 好 , 符合 最小二乘原理。 3. 4 . 2 回归显著 性系数 ( g) IC50 计算 中回归 系数 ( b) 也有

因为 细胞体外 用药

是极其微量的 , 可以达到 10 m o l L , 甚 至更低 , 在应用 软 件求解时 , 可能会出现小数位数太多无法显示的情况 , 一方面 可用科 学计数法 来表示 , 另一方面 可以在计算 把所有的 药物 浓度同时扩大 105 倍 , 求得 IC50后再转化回来。 参考文献 :
[ 1] [ 2] [ 3] [ 4] [ 5] R I 弗雷谢尼 , 动物细胞培养基本技术指南 ( 分子克隆实 验指南 系列 ) [ M ] . 第 4版 . 北京 : 科学出版社 , 2004: 398- 400 . 司徒镇强 , 吴军 正 . 细 胞培养 [ M ] . 西 安 : 世界图 书出版 公司 , 2004 : 250 - 2 . 孙瑞元 . 定量药理学 [ M ] . 北京 : 人民 卫生出版 社 , 1987 : 155 61 . 刘昌孝 , 孙瑞元 . 药物评价实验设 计与统计 学基础 [ M ]. 北京 : 军事医学科学出版社 , 2001: 84- 9 . Y am J , R eer PJ , B ruce RD. C om parison of th e up -and -down m ethod and th e f ixed -dose procedu re for acu te oral tox icity test ing [ M ] . Food C hem Toxico. l EN GLAND, 1991 : 259 - 63. [ 6] V an d en H euvelM J , C lar k DG, F ielder R J , et a.l Th e in ternational validat ion of a fixed-dose procedu re as an alternat ive to the classical LD50 test[ M 1] . Food Chem Tox ico.l ENGLAN D, 1990: 469- 82 .

其标准误 ( S b ), F e iller氏提出 回归显 著性系 数 ( g) , g 是 Sb 与回归系数 ( 斜率 b) 的比值之函数 , 当 g小 于 0 . 1 时 , 可略而 不计 , 如果 g大于 0 . 1, 则回归 显著 性系 数的 影 响不 容忽 视 , 应当采用 F eiller校正式来计算更为精确的 95% 可信限。 4 IC50 在 M TT法检测药物对 培养细胞的增殖抑制作用中的 特点及注意事项 4. 1 M TT 法中计算 IC50 的特点 在用 M TT 法 测细胞 增殖

抑制率时 , 常需计算药物的 IC50 值 , 并通过 IC50值 的大小 来判

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口服药物服用的最佳时间和方法
赵丽华, 徐学君 , 邹若飞
( 武警安徽总队医院药械科 , 安徽 合肥 关键词 : 口服药物 ; 服药时间 ; 服药方法 口服 药物 具有服 用方 便、 疗效可 靠、 病人 易于掌 握等 优 点 , 在临床上广泛应用。随着医药科学的发展 , 人 们发现许多 口服药物的最佳服药 时间与药物的疗效密切相关 , 用药时 间、 方法和剂量是临床安全有效 用药的重要基础。依据 药物作用 的时间节律确定最佳投药方案 , 既可节省药物又降低毒性和提 高疗效。国内外大量临床研究资料表明 , 人体的生理和病理变 化有昼夜节律性波动现象, 如胃酸分泌、 糖皮质激素分泌、 胆固 醇合成、 哮喘发作等 [ 1] 。根据疾病的昼夜节 律性波动现 象 , 选 择最佳服药时间 , 达到最佳疗效并可避免某些不良反应 [ 2] 。 1 1 d服用 1 次的药物 1. 1 需早上服用的药物 [ 3 ] 1. 1 . 1 肾上腺皮质激素 如泼尼松 ( 强的松 ) 、 泼尼松龙 ( 强 的松龙 ) 、 倍他米松、 地 塞米松 ( 氟美松 ) 等 , 因为人 体内 激素 的分泌高峰出现在晨 7~ 8 时 , 此时服用可避免药物对 激素分 泌的反射性抑 制作 用 , 对下 丘脑 垂 体肾上 腺皮 质的 抑制 较 轻 , 可减少不良反应 [ 4] 。 1. 1 . 2 降压药 血压在早晨和下午各出现 1 次高峰, 因此有效 控制血压, 如每日仅服 1次的长效降压药如氨氯地平、 依那普利、 贝那普利、 拉西地平、 氯沙坦、 缬沙坦、 索他洛尔、 复方降压灵宜在 早 7时左右服; 每日服 2次的宜在下午 4 时再补充 1次 [ 5] 。 1. 1 . 3 抗抑郁药 抑郁的症状如忧郁、 焦虑、 猜疑等常表现为 晨重晚轻, 因此氟西汀、 帕罗西汀、 瑞波西汀、 氟伏沙明宜清晨服。 1. 1 . 4 利尿药 避免夜 间多次起床 , 影响睡眠和休 息。如呋 塞米 ( 速尿 ) 、 螺内酯 ( 安体舒通 ) 。 1. 1 . 5 泻药 硫酸镁盐类泻药晨 服可迅速在肠道发挥作 用 , 服后 5 h 致泻。 1. 2 需晚上服用的药物 1. 2 . 1 他汀类调 血脂药 近 年来 研究 发现 , 人体 内的 胆固 醇合成有昼夜节律性 ; 在午夜至清晨之间合成最旺盛 , 故对于 调血脂药物如洛伐他汀、 辛伐他汀、 普伐 他汀、 阿伐他汀等 , 采 用每日睡前顿服 , 代替每日 3 次服药效果最佳 [ 6] 。 1. 2 . 2 抗哮喘药 [ 7] 据统计哮喘在睡眠时 的发作率 是白天 的 100 倍。哮喘多在夜间凌 晨发作 , 晚上 服用氨 茶碱与 白天
[ 7] H al leW. Th eR egis try of Cytotoxicity: toxicity test ing in cell cultures to pred ict acute toxicity ( LD50 ) and to redu ce test ing in an i m als [ M ] . A ltern Lab A n i m. Eng land , 2003: 89 - 198 . [ 8] S ch lede E, G en schow E, Sp iel m ann H, et a. l O ral acu te toxic class m ethod : a su ccessfu l altern at ive to the oral LD 50 test [ M ] . R egu l Tox ico l Phar maco. l U n ited S tates , 2005: 15 - 23 . [ 9] 周一平 . 用 spss 软 件计 算 新 药的 LD _ ( 50 ) [ J] . 药 学进 展 , 2003 , 27( 5 ) : 314- 6 . [ 10 ] 李保华 , 董向 丽 , 孙 显明 , 等 . 用于 计算 半数致 死量 ( LD 50 ) 的 sas程序 [ J] . 莱阳农学院学报 , 2004, 21( 4) : 269- 74 ..

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服用相比较 , 有较 低的 血药 峰浓 度和 较长 的药 物峰 值 时间。 氨茶碱的疗效结果比较显示 , 每晚 8 时 口服 1 次 的平喘效 果 显著优于每日 2 次给药方 案。因哮喘 多在夜 间凌晨 发作 , 故 1 日服 用 1 次的 抗哮 喘药 多在 睡 前半 小时 口 服。常 用药 物 有 : 氨茶碱缓释片、 长效 2 受体激动药 ; 班布特 罗、 福 莫特罗、 沙美特罗等 , 白三烯受体拮抗药 , 孟鲁司特等。 1 . 2. 3 催眠药 起效慢的如苯二氮卓类的劳拉西 泮 , 需 睡前 半小时服用 [ 8] 。 1 . 2 . 4 轻泻药 治 便秘的温 和泻药 如比沙 可啶、 酚酞 、 液状 石蜡等 , 服用后 8~ 10 h 见 效 , 均需 在睡前 半小 时服用 , 次 日 早晨排便。 1 . 2 . 5 H 2受体拮 抗剂 ( 抗酸 药 ) 西 咪替丁、 法莫替丁、 奥美 拉唑、 兰索拉唑、 泮托拉 唑等 , 均有极 强的抑 制胃肠 分泌的 作 用。它们不仅能缓解因 溃疡引 起的疼 痛 , 而 且可制 止因溃 疡 引起的上消化道出血。所以 在疾病 的急性 期早晚 各服 1 次 , 待疾病缓解稳 定后 , 改 为每 晚服 用 1 次维 持量 [ 9] 。近 年来 , 国内外 学者多主 张采用全天 量睡前顿服 的疗法 , 因为胃 酸的 分泌有昼少夜多的规律 ( 人体胃酸 的分泌 从中午 开始缓慢 升 高 ; 夜间 20 时急剧升高 , 22 时左右达 高峰 ) 。临床研究显 示 本类药物睡前顿服与分次疗效相同或更优 , 不仅方便患者 , 而 且减少不良反应 [ 10] 。 1 . 2 . 6 阿片类镇痛 药 二氢 埃托啡 , 美 沙酮 , 曲马 多用于 癌 症病人的止痛 , 以夜晚临睡前服用为好 , 因为人的痛 觉以上午 最为迟钝 , 而午夜至凌晨最为敏感 , 这与脑中存在的 内源性脑 啡肽等止痛物质有关。 1 . 2 . 7 其他类 ( 1) 抗 结核药 [ 11] 异烟肼晚间 顿服较早 晨顿 服抗结核效果好 , 血 药 浓度 测定 表明 , 晚间 服药 后 1 h 高 峰 期 , 远比早上服药 1 h 高峰期要高 , 半衰期由早上 2~ 5 h 延长 到晚上 4 h。 ( 早上使脑垂体 2肾 上腺轴和广泛的交感肾上腺 能系统兴奋 , 促进了体内代谢转化和排泄速度 , 而晚 上各组织 器官松弛 , 激素水平较低 , 对异 烟肼的 代谢相对 减慢 , 故异 烟 肼晚上顿服有利于增强抗结核 作用 ) ; ( 2) 受 体阻滞药 特 拉唑嗪 , 亦须睡前服 用 , 以免引 起体 位性低 血压 ; ( 3) 氟桂 利 嗪 , 有嗜 睡副作用 , 需在睡前半小时服用 ; ( 4) 铁剂 , 宜在 晚上 19 时服用 ; ( 5) 降胆固醇药 , 宜在晚餐时服用。这是因为人体
[ 11 ] 黄 卓 , 唐黎明 , 王依 婷 , 等 . 采 用 sas 软件包 进行半 数致 死量

( LD _( 50 ) ) 的计算 [ J] . 药学服务与研究 , 2002 , 2( 3 ) : 183- 5 . [ 12 ] 梅开顺 . 概率单位加权回归 法计 算 LD _( 50) 在微机 上的 应用 [ J]. 中国媒介生物学及控制杂志 , 2000 , 11( 5 ): 366 . [ 13 ] 马桢红 , 马良才 . 生物测定中 LC _( 50 )或 LD _( 50) 的 E xcell运 算方法 [ J] . 医学动物防制 , 1999 , 15( 11 ): 612- 4. [ 14 ] M os m ann T. R ap id colori m etric assay for cellu lar grow th and su rvival : app licat ion to prol iferation and cytotoxicity assays[ M ] . J I mm u no lM ethod s . N ETHERLAN DS, 1983: 55- 63 . ( 收稿日期 : 2007 - 03- 26)


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